以铜纳米簇为荧光探针的分析方法研究

发布时间：2017-10-25 18:08

  本文关键词：以铜纳米簇为荧光探针的分析方法研究

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【摘要】：传统的有机荧光染料已广泛地应用于荧光生物分析中。但有机荧光染料存在生物相容性较差、光漂白严重等弊端。荧光金属纳米簇因为其易于合成,水溶性好,毒性低,生物相容性好,在荧光分析中具有很好的应用前景。本论文以铜纳米簇作为荧光探针,探索了其在生物传感分析领域的应用。具体的工作内容如下：一.以铜纳米簇为荧光探针灵敏检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是一种催化从含尿嘧啶的DNA上释放尿嘧啶的碱基切除修复酶。对UDG活性的研究对于进一步地了解DNA的损伤修复以及更好地发展分子生物学的相关研究有着重要的意义。在本研究中,我们设计了含有尿嘧啶的双链DNA为UDG酶的底物,该底物由聚AT-TA的DNA序列组成,也可以作为铜纳米簇合成时的高效模板。在此双链DNA模板存在下,二价铜离子与抗坏血酸反应可生成具有强荧光发射的铜纳米簇(CuNCs)。当体系加入UDG之后,尿嘧啶从双链DNA上被移除,使双链DNA解旋为单链DNA,而单链DNA不是CuNCs的有效模板,铜纳米簇很难形成,体系荧光强度很弱。可以通过体系荧光强度的变化实现对UDG活性的检测。本研究详细地优化探针的序列(选择尿嘧啶的在双链DNA上的个数以及排布位置)和反应条件,从而提高了对UDG检测的灵敏度。本法检测UDG酶的检出限为0.0005 U/mL。该方法用于对细胞裂解液中的UDG活性的检测,也用于对UDG的抑制剂(UGI)抑制能力的研究。本方法简单快速,而且灵敏,为检测UDG的活性提供了一种荧光新方法。二.以铜纳米簇为荧光探针测定谷胱甘肽本文以聚AT-TA序列的DNA作为合成铜纳米簇的高效模板,当体系中加入谷胱甘肽这种巯基化合物之后,体系的荧光强度减弱。据此,建立了一种荧光测定谷胱甘肽的方法。我们探讨了谷胱甘肽淬灭此体系荧光的机理。该方法测定谷胱甘肽的线性关系范围为0.01 gM～1μM,检出限为3.9 nM。与报道的金属纳米簇为荧光探针检测谷胱甘肽的方法,本法的灵敏度显著提高,检出限低了将近三个数量级。
【关键词】：荧光分析 铜纳米簇 尿嘧啶-DNA糖基化酶 酶抑制剂 谷胱甘肽
【学位授予单位】：陕西师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O657.3
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第1章 综述7-21
• 1.1 金属纳米簇概述7
• 1.2 金属纳米簇的合成方法7-13
• 1.2.1 金纳米簇的合成7-9
• 1.2.2 银纳米簇的合成9-10
• 1.2.3 铂纳米簇的合成10
• 1.2.4 铜纳米簇的合成10-13
• 1.3 金属纳米簇的应用13-20
• 1.3.1 生物小分子的检测13-15
• 1.3.2 金属离子的检测15-16
• 1.3.3 核酸检测16-18
• 1.3.4 蛋白质检测18-20
• 1.4 本论文选题目的和意义20-21
• 第2章 研究报告21-53
• 2.1 以铜纳米簇为荧光探针灵敏检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性21-41
• 2.1.1 引言21-22
• 2.1.2 实验部分22-25
• 2.1.3 结果与讨论25-41
• 2.1.4 小结41
• 2.2 以铜纳米簇荧光探针测定谷胱甘肽41-53
• 2.2.1 引言41-43
• 2.2.2 实验部分43-44
• 2.2.3 结果与讨论44-51
• 2.2.4 小结51-53
• 结论53-55
• 参考文献55-69
• 致谢69-71
• 攻读学位期间研究成果71

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本文编号：1094875