新型固定化金属螯合亲和层析介质构建及表征

发布时间：2017-12-30 02:18

  本文关键词：新型固定化金属螯合亲和层析介质构建及表征　出处：《哈尔滨商业大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：本实验分别对乳化冷却法制备琼脂糖微球工艺、琼脂糖表面改性工艺、琼脂糖微球表面IDA固定化及冷冻凝胶法制备IMAC (Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC固定化金属螯合亲和层析)介质工艺进行系统性研究,并对所制备介质进行表征及研究其在分离纯化生物大分子物质方面的应用。从而构建出可以在复杂环境中一步完成目的产物的过滤、分离纯化浓缩,减少了固液分离和初级分离步骤的新型固定化金属螯合亲和层析介质,具体研究如下：采用乳化冷却法制备尺寸均一且小于25μm的琼脂糖微球,以一定质量琼脂糖水溶液作为水相,以一定比例span-85和石蜡油的混合溶液作为油相。通过电子显微镜观察,以观察所得微球粒径及其分布率为指标,研究制备琼脂糖微球的相关影响因素。实验得知：琼脂糖浓度为4%,乳化剂浓度为3%,搅拌速度为中速,搅拌时间为2 min。在此条件下,可得粒径较为集中且尺寸均一且小于25μm的琼脂糖微球。以琼脂糖微球为实验材料,以二甲基亚砜、环氧氯丙烷、NaOH分别作为反应体系和活化剂,以微球表面环氧基修饰密度为指标,研究固相载体表面活化的相关影响因素。实验得知：二甲基亚砜80%、NaOH 0.8 mol·L-1、环氧氯丙烷10%、反应时间3 h、反应温度50℃、摇床转速170r/min。此条件下,微球表面环氧基密度最高即活化效率最高。采用冷冻凝胶成型法,以活化后琼脂糖微球作为实验材料,戊二醛为交联剂,亚氨基二乙酸为配基,制备金属螯合亲和层析介质。以IDA接枝密度为指标,研究琼脂糖微球表面IDA固定化影响因素。研究发现：琼脂糖与IDA添加比例为1：0.58、戊二醛浓度为35%、反应环境pH值为10,在此条件下IDA接枝密度达到最高。以所制备IMAC固定化金属螯合亲和层析介质为实验材料,对其性能进行表征,同时研究其对生物大分子物质分离纯化能力。研究表明：通过SEM图像可知,所制备亲和层析介质经过表面改性、IDA固定化,其粒径仍就较均一且在25μm以下,符合尺寸要求,且制备介质具有一定的孔隙结构;通过IR图像分析可知,在910 cm-1有明显环氧官能团特征峰,表明琼脂糖微球活化成功；在1630-1700 cm-1区间的吸收峰应为醛或酮类CO双键产生的吸收峰,表明在此峰段内产生羧基、羟基特征峰,表明IDA接枝成功；通过铜离子结合标准曲线得知,亲和层析介质铜离子螯合率为73.45%：盐析法制备卵白蛋白粗品经分离纯化及SDS-PAGE电泳实验得知,固定化金属螯合亲和层析介质饱和吸附量为91.95mg,卵白蛋白回收率为85.37%,说明IMAC固定化金属螯合亲和层析介质具备较好的分离纯化能力。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：哈尔滨商业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O658

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本文编号：1352915