全蛋液中恩诺沙星药物残留基体标准物质的研制

发布时间：2020-05-13 05:26

【摘要】：恩诺沙星作为第三代氟喹诺酮类药物,在人类和兽医医学中有十分广泛的应用,可用于治疗包括泌尿、呼吸道和胃肠道感染等多种疾病。但其在畜禽养殖中的不规范使用会提高病原微生物耐药性、危害人体健康以及给公共卫生安全带来威胁。因此,我国农业部颁布的235等公告中,对恩诺沙星的使用及限量做出了明确的确定,特别强调产蛋鸡禁用,并配套了相关的检测标准等,以确保农产品质量安全。恩诺沙星作为兽药残留监控计划中重要的监控参数,已列入农业部全国及地方范围内水产、畜禽等例行监测、专项监测计划中,但近年来畜禽产品风险监测结果显示,家禽等我国大宗畜禽产品中恩诺沙星等氟喹诺酮类药物仍持续有一定程度检出。因此,恩诺沙星也成为了当前我国鸡蛋等畜禽产品质量安全监控的重点。为确保监测结果的准确可靠,有效支撑政府监管工作,保证测量结果可靠性、可比性、准确性,急需研制相关纯度及基体标准物质。1.针对全蛋液中恩诺沙星基体标准物质的研究,本论文首先开展了恩诺沙星纯度标准物质的研制,以建立完整溯源链。实验通过红外光谱法和质谱法对候选物进行定性,后采用两种不同原理的方法-质量平衡法和定量核磁法对候选物进行纯度定值,后进行均匀性和稳定性的监测和考察,同时对整个纯度标准物质研制过程中的不确定度进行评估。最终获得恩诺沙星纯度标准物质量值准确,均匀性和稳定性均能达到技术要求,纯度为99.7%。扩展不确定度为0.4(k=2),并成功申报为国家二级标准物质(GBW(E)090817)。2.本论文建立了针对基体标准物质的高准确度定值方法。以同位素标记恩诺沙星为内标,基于分散固相萃取前处理技术、结合高灵敏度三重四极质谱分析技术、建立全蛋液中恩诺沙星残留分析液相色谱-同位素稀释质谱法,准确测量鸡蛋中恩诺沙星药物残留含量。方法检出限及定量限分别为0.5μg/kg和1.5μg/kg。在0.5μg/kg～100μg/kg内线性良好,2μg/kg～20μg/kg浓度添加范围内回收率在95%-105%之间,可满足基体标准物质的定值需求。3.研制全蛋液中恩诺沙星药物残留基体标准物质。对蛋鸡通过口服连续给药5天,采集从给药的第1天至给药结束后的第9天,即14天内的鸡蛋,分析其残留消除规律。针对符合浓度水平要求的鸡蛋样品原料,通过蛋液混合-均质-封装-辐照灭菌-封装-超低温保存等制备工艺,进而获得全蛋液基体标准物质候选物。采用已建立的同位素稀释质谱法,联合多家实验室对标准物质进行定值研究。同时系统全面的研究鸡蛋基体标准物质的均匀性、稳定性等关键技术,获得研制结果如下:全蛋液中恩诺沙星药物残留基体标准物质的特性量值及其扩展不确定度(k=2)为30.6μg/kg±2.8μg/kg;长期稳定性考察结果表明,于-80℃条件下保存,基体标准物质目前满足9个月稳定。本研究的实施将为我国鸡蛋产品质量安全风险监测与评估结果的准确、可比、可溯源提供技术基础保障。
【图文】：

流程图,标准物质,流程

逦逦逦图１－１标准物质研制流程逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ－１邋Ｔｈｅ邋ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ邋ｍａｔｅｒｉａｌｓ逡逑１逡逑

恩诺沙星,标准物质,分装,纯度

将经过主成分定性分析且充分混合好的恩诺沙星标准物质原料，减压干燥后，置于洁净、干逡逑燥的分装环境中平衡后，分装至５ｍＬ洁净棕色西林瓶中，密封，压盖。每个包装量为ｌＯＯｍｇ，共逡逑４００个包装单元。置于４°Ｃ冰箱内保存（如图２－２）。逡逑图２－２恩诺沙星纯度标准物质的分装逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｐａｒｔｉｔｉｏｎ邋ｏｆ邋Ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ邋ｐｕｒｉｔｙ邋ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ邋ｍａｔｅｒｉａｌ逡逑２．３．４均匀性考察逡逑按照ＪＪＧ邋１００６－１９９４“一级标准物质技术规范”，，以及ＪＪＦ邋１３４３－２０１２“标准物质定值的通用原则逡逑及统计学原理”中的技术要求，当包装单在２００－５００之间时，抽取单元数不少于１５个。因此，本逡逑研宄对己分装好恩诺沙星标准物质进行均匀性检验。从中随机抽取１５个包装，将每个包装分别逡逑配置成浓度为１００邋ｍｇ／Ｌ的甲醇溶液，然后采取高效液相色谱法检验其均匀性。逡逑２．３．５稳定性考察逡逑２．３．５．１长期稳定性考察逡逑据ＪＪＧ１００６－１９９４《一级标准物质技术规范》中的要求，按照先密后疏的原则对标准物质稳定逡逑性考察进行。本研宄采用液相色谱法，分别在第０－６个月对标准物质进行长期稳定性考察（杨梦瑞逡逑等，２０１６）。每次抽取２个包装，采用重量－容量法配制溶液，每个包装平行测定３次。逡逑２．３．５．２灥稳定性考察逡逑对标准物质的保存环境模拟成运输条件
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：O657.63;TS253.7

【参考文献】