新型正反相联用色谱的构建与应用

发布时间：2020-06-02 00:45

【摘要】：二维液相色谱因其较好的分离能力而在天然产物的分析分离中被广泛应用,其中NPLC×RPLC的正交性最好,却一直存在溶剂不兼容的问题,为体系开发带来诸多困难。然而本课题在研究不同有机溶剂时意外发现,正己烷对反相色谱行为的影响较小,用其溶解样品在反相色谱分析时甚至可以获得优于甲醇等溶剂的分离效果,因此传统认知中关于有机溶剂的溶剂效应问题有待确证。为进一步证明该发现的正确性,本课题以不同极性的模式化合物为研究对象考察了不同溶剂体系对反相色谱的分离性能的影响,并在此基础上进行了正己烷溶剂体系在反相色谱中的适应性研究,最终确证反相色谱可耐受一定量的正己烷,从而得到优于甲醇等溶解样品的分离效果。基于此理论,本课题尝试构建新型正反相二维联用色谱体系,虽然在分析型二维色谱系统方面没有取得显著成效,但构建了新型NPLC×RPLC二维离线制备体系,以蟾酥为模式药材验证了体系的可行性,并将此新型体系应用于深海宏基因克隆子4-1菌株的成分分离,从菌株发酵液提取物中共分离出20个单体化合物。本文首次提出以正己烷为溶剂体系溶解样品在反相色谱中不会产生较强溶剂效应的理论,为后续的正反相联用色谱体系的开发提供了一定的理论基础,开发的新型NPLC×RPLC联用制备色谱可用于天然产物的分离分析。
【图文】：

实例图,流动相,两维,不利影响

时可能导致“指性粘连”［３４］。这种效应发生在两种液体之间的界面上，因为低粘度逡逑的第二维流动相可能在透过多孔介质的同时部分渗透进入带有样品的高粘度溶逡逑剂中，形状类似于手指（如图１－４所示）。液相色谱分离性能受到危害，并且在逡逑情况严重时可能会观察到峰裂分［３５］。逡逑１逡逑０逦５０逦ＸＯＯ逦ｉ５０逦２００逦２５０逦ＷＯ逡逑Ｆｉｒｓｔ邋ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ邋ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ邋ｔｉｍｅ邋（ｍｌｏ）邋－邋Ｍｉｘｅｄ－ｍｏｄｅ逡逑图１－４两维之间流动相不兼容对色谱峰的不利影响实例％。逡逑１．３．３第一维溶剂与第二维色谱柱不匹配逡逑离子交换色谱和反相色谱因选择性不同而具有很好的正交性，离子交换色谱逡逑的流动相采用一定ｐＨ值和离子强度的缓冲溶剂，含有不同离子，当与反相色谱逡逑柱联用时，大量缓冲盐直接进入第二维，会对反相色谱行为产生不良影响，甚至逡逑损伤色谱柱，导致柱效降低。逡逑４逡逑

示意图,溶剂蒸发,系统装置,液相色谱

续富集在正相富集柱上。用甲醇洗脱液将组分从正相富集柱上洗脱下来，流出液逡逑用水稀释进入反相富集柱，后被送入反相制备柱进行分析分离，该系统的示意图逡逑如图１－６所示。这是首次将正反相二维联用系统应用于在线全二维制备上。为验逡逑证系统可行性，还采用白花前胡作为样品进行制备，共得到１９个纯度较高的单逡逑体，其中还发现了两个新化合物。与之前研究开发的接口相比，，具有更大的载样逡逑量和样品分离能力，更适合用于天然产物分离，但由于需要调节以提供稳定的氮逡逑气气流，在操作上具有一定的难度，增加了系统的复杂性。逡逑６逡逑
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：O652.63

【参考文献】