利用CuAAC反应构建香豆素型荧光探针及其酶活检测应用
发布时间：2020-12-17 03:54
点击反应是一类高效、简单的化学反应总称,主要是利用小单元的连接,高效快速的完成多种分子的合成。在所有点击反应中,亚铜离子催化叠氮基和炔基的Huisgen-1,3-偶极环加成反应（Copper（I）-Catalyzed Azide/Alkyne Cycloaddition,CuAAC）最为经典。在亚铜离子的催化下,叠氮基和炔基化合物能够快速的发生CuAAC反应,生成具有特殊性质的1,2,3-三唑类产物。该反应不仅操作简单,产率高,而且化学选择性好。香豆素荧光探针技术在生物化学领域应用十分广泛,该技术灵敏度高,选择性好。在此,我们基于点击化学原理利用香豆素荧光探针技术对β-葡萄糖苷酶、碱性磷酸酶、脂肪酶的活性检测方法进行了探索。本文的工作主要从以下几个方面进行展开:1、合成4-甲基-7-乙炔基香豆素荧光探针分子。通过间苯二酚和乙酰乙酸乙酯合成荧光较强的4-甲基-7-羟基-香豆素,然后经3步反应将7位的羟基转化成具有吸电子效应的乙炔基,生成荧光猝灭的4-甲基-7-乙炔基香豆素荧光探针分子,每步产率均在70%以上。2、合成酶水解底物2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸（AA-2βG）以及抗坏...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
叠氮-炔的1,3-偶极环加成反应Fig.1-1Husigen1,3-dipolarcycloadditionofazidesandterminalalkynes
华中农业大学 2018 届硕士研究生学位论文的亲核开环反应（Kolb and Sharpless 2003, Hein et al 2008），元杂原子张力环的亲核开环来释放它们内在的张力能，如环环状硫酸酯、环硫鎓离子和吖丙啶鎓离子等的开环反应，反图 1-2 亲核开环反应Fig. 1-2 Nucleophilic ring-opening reaction的羰基化合物的缩合反应（Kolb et al 2001, Hein et al 2008），脲、硫脲和肟醚等的形成，反应方程式如图 1-3。
腙、肟、脲、硫脲和肟醚等的形成，反应方程式如图 1-3。(a)(b)图 1-3 非醇醛的羰基化合物的缩合反应（a）腙、肟、肟醚的形成；（b）脲的形成Fig. 1-3 Condensation reaction of nonaldol carbonyl compounds(a) The formation of hydrazone/oxime ether; (b) The formation of urea）碳碳不饱和键的加成反应（Kolb et al 2001, Kolb and Sharpless 2003, Hein et a8），如环氧化反应、氮杂环丙烷化反应、亚磺酰卤化反应及麦克尔加成反应等，方程式如图 1-4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]三种抗坏血酸糖苷的合成及其α-糖苷酶抑制活性[J]. 马济美,谢凌云,王龙文,陈杭炜,曾贞,陈浩,江洪. 有机化学. 2017(06)
[2]香豆素类荧光底物的合成及其在微生物检测中的应用进展[J]. 吴清平,马延霞,张菊梅,韦献虎. 化工进展. 2014(09)
[3]4-甲基伞形酮辛酯试验检测水中沙门菌方法研究[J]. 张伟,孙宗科,鲁波,王友斌,丁培,郑萍,陈西平. 卫生研究. 2010(03)
[4]β-葡萄糖苷酶对绿茶汤香气的影响[J]. 孙其富,梁月荣,陆建良. 茶叶. 2007(04)
[5]应用4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷快速检测食品中的大肠菌群[J]. 李平,甄宏太,方原民,周洪斌,朱金连,肖震. 食品科学. 2007(04)
[6]β-葡萄糖苷酶促进纤维素降解的应用[J]. 张裕卿,梁江华,李滨县. 天津大学学报. 2007(03)
[7]β-葡萄糖苷酶的研究及应用进展[J]. 潘利华,罗建平. 食品科学. 2006(12)
[8]京尼平苷为底物测定β-葡萄糖苷酶活力的方法[J]. 梁华正,刘富梁,彭玲西,吴志梅. 食品科学. 2006(04)
[9]脂肪酶活力测定方法的改进[J]. 纪建业. 通化师范学院学报. 2005(06)
[10]β-葡萄糖苷酶在工农医领域的应用[J]. 邵金辉,韩金祥,朱有名,吴围屏,吴坚美. 生命的化学. 2005(01)
本文编号：2921364
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
叠氮-炔的1,3-偶极环加成反应Fig.1-1Husigen1,3-dipolarcycloadditionofazidesandterminalalkynes
华中农业大学 2018 届硕士研究生学位论文的亲核开环反应（Kolb and Sharpless 2003, Hein et al 2008），元杂原子张力环的亲核开环来释放它们内在的张力能，如环环状硫酸酯、环硫鎓离子和吖丙啶鎓离子等的开环反应，反图 1-2 亲核开环反应Fig. 1-2 Nucleophilic ring-opening reaction的羰基化合物的缩合反应（Kolb et al 2001, Hein et al 2008），脲、硫脲和肟醚等的形成，反应方程式如图 1-3。
腙、肟、脲、硫脲和肟醚等的形成，反应方程式如图 1-3。(a)(b)图 1-3 非醇醛的羰基化合物的缩合反应（a）腙、肟、肟醚的形成；（b）脲的形成Fig. 1-3 Condensation reaction of nonaldol carbonyl compounds(a) The formation of hydrazone/oxime ether; (b) The formation of urea）碳碳不饱和键的加成反应（Kolb et al 2001, Kolb and Sharpless 2003, Hein et a8），如环氧化反应、氮杂环丙烷化反应、亚磺酰卤化反应及麦克尔加成反应等，方程式如图 1-4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]三种抗坏血酸糖苷的合成及其α-糖苷酶抑制活性[J]. 马济美,谢凌云,王龙文,陈杭炜,曾贞,陈浩,江洪. 有机化学. 2017(06)
[2]香豆素类荧光底物的合成及其在微生物检测中的应用进展[J]. 吴清平,马延霞,张菊梅,韦献虎. 化工进展. 2014(09)
[3]4-甲基伞形酮辛酯试验检测水中沙门菌方法研究[J]. 张伟,孙宗科,鲁波,王友斌,丁培,郑萍,陈西平. 卫生研究. 2010(03)
[4]β-葡萄糖苷酶对绿茶汤香气的影响[J]. 孙其富,梁月荣,陆建良. 茶叶. 2007(04)
[5]应用4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷快速检测食品中的大肠菌群[J]. 李平,甄宏太,方原民,周洪斌,朱金连,肖震. 食品科学. 2007(04)
[6]β-葡萄糖苷酶促进纤维素降解的应用[J]. 张裕卿,梁江华,李滨县. 天津大学学报. 2007(03)
[7]β-葡萄糖苷酶的研究及应用进展[J]. 潘利华,罗建平. 食品科学. 2006(12)
[8]京尼平苷为底物测定β-葡萄糖苷酶活力的方法[J]. 梁华正,刘富梁,彭玲西,吴志梅. 食品科学. 2006(04)
[9]脂肪酶活力测定方法的改进[J]. 纪建业. 通化师范学院学报. 2005(06)
[10]β-葡萄糖苷酶在工农医领域的应用[J]. 邵金辉,韩金祥,朱有名,吴围屏,吴坚美. 生命的化学. 2005(01)
本文编号：2921364
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