蛋白印迹考马斯亮蓝显色水凝胶对目标分子的特异性识别

发布时间：2021-01-03 19:11

　　一直以来,蛋白质都是生物体生命活动的核心物质,在生物体内扮演着催化、运输、免疫调节等角色。也正因此,蛋白质的分离与检测越来越受人关注。传统单一的蛋白质检测手段由于其特异性差、操作繁琐等局限性的存在,促使越来越多的科研工作者投入到蛋白质检测领域中。考马斯亮蓝蛋白质检测法由于其检测速度快等优点而备受关注,但色素与蛋白质作用时所缺少的特异性作用是该方法的不足之处。而常用蛋白质检测手段中,具有良好特异性的免疫印迹法又由于抗体的制备与保存问题导致成本过高、推广困难。源于生物免疫作用的分子印迹技术能够制备出名为分子印迹聚合物的抗体类似物,利用该技术制备聚合物具有操作简便、材料易保存等优点。该技术的出现能够很好的解决免疫印迹法的不足之处。因此,为了将两种技术结合起来,本文研究了考马斯亮蓝与蛋白质的作用机理,并用于指导考马斯亮蓝蛋白检测法与分子印迹技术的联用,制备出分子印迹显色水凝胶。首先,我们研究了pH对考马斯亮蓝溶液颜色、吸收峰及其与蛋白质作用的影响。通过改变考马斯亮蓝与蛋白质的浓度,考察显色的规律。证明了考马斯亮蓝分子存在的三种形态均能与牛血清白蛋白发生作用,作用后得到的缔合物吸收峰在610 n... 

【文章来源】：福州大学福建省 211工程院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－２考马斯亮蓝分子结构式??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃｏｏｍａｓｓｉｅ?ｂｒｉｌｌｉａｎｔ?ｂｌｕｅ??

圳、传感器疾病检测［７１，７＼人造抗体［７３，７？等各个领域。??分子印迹聚合物的基本制备过程［７５］可用图１－３表示。首先，让模板分子与功??能单体预组装；其次，加入适当的交联剂并引发单体间的聚合；之后用适当的洗??脱剂破坏模板分子与功能单体间的相互作用，将模板分子从聚合物上洗脱下来，??便可得到分子印迹聚合物。ＭＩＰｓ可选择性吸附目标分子，而且可以能够反复洗??脱与再次吸附，次数由材料的性质决定。??？?ＳｒｆＩ．ｗＬ．ｌｙ?Ａ??＾?ｍＷ?■??Ｔｅｎ＾ｌａｌｅ?ｊ??———－■?Ｗ??ｋＪ?ｍＺＭ??图１－３分子印迹技术原理示意图??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｈｅ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ?ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ??分子印迹技术按单体与模板分子在溶剂中的作用方式的不同，大致可以分为??四种，共价键法、非共价键法和半共价键法。??８??

?蛋白印迹考马斯亮蓝显色水凝胶对目标分子的特异性识别???１）共价键法又称为预组装法（见图１－４），由＼＾１扭７６］团队提出。功能单体??与模板分子之间的结合位点依靠共价键完成，聚合后，再断裂共价键以洗脱模板??分子。共价键法所用的物质有硼酸酯、缩醛酮、螯合物、席夫碱、酯等［７７］。该??方法的不足之处在于识别能力不高，不适用于快速识别。因为共价键的作用力强、??解离速度慢，所形成复合物的过程速度缓慢。Ｇｕ［７８］等以多巴胺为模板，将聚合??物涂于玻璃碳电极上，通过硼氢化学键与空间位阻的双识别性能来设计分子印迹??传感器，并将该传感器成功应用于检测人血浆样本中的多巴胺。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]酪氨酸酶催化乳清蛋白聚合耦联超滤的效果研究[J]. 王文琼,张兰威,韩雪.  食品与发酵工业. 2017(09)
[2]聚乙二醇沉淀蛋清蛋白质的规律及在卵白蛋白分离中的应用[J]. 闻崇炜,赵烨清,石莉,欧阳臻.  食品科学. 2018(01)
[3]考马斯亮蓝G-250与牛血清白蛋白的相互作用研究[J]. 王永刚,王世伟,李云春,冷非凡,马建忠,王晓力,庄岩.  现代食品科技. 2016(01)
[4]蛋白质组学实验技术及其应用[J]. 赵静,王宏伟,田二杰,周变华.  动物医学进展. 2015(01)
[5]生物质谱技术研究进展及其在蛋白质组学中的应用[J]. 杨倩,王丹,常丽丽,孙勇,靳翔,王旭初.  中国农学通报. 2015(01)
[6]蛋白质分子印迹技术的研究进展及应用前景[J]. 孙寅静,罗文卿,潘俊.  药学学报. 2011(02)
[7]考马斯亮蓝显色剂变色反应机理的研究[J]. 曹稳根,焦庆才,刘茜,陈雷.  化学学报. 2002(09)

博士论文
[1]牛血清白蛋白表面印迹材料的制备及其大分子识别特性之研究[D]. 史楠.中北大学 2015

硕士论文
[1]分子印迹技术及其研究进展[D]. 韩霜.东北石油大学 2014



本文编号：2955337