基于核酸外切酶Ⅲ及DNAzyme的铅离子荧光传感器的研究

发布时间：2021-02-14 23:22

　　利用DNAzyme及核酸外切酶Ⅲ（ExoⅢ）构建了荧光生物传感器用于检测铅离子(Pb²⁺)。DNAzyme与底物探针结合并在Pb²⁺辅助作用下切割底物,使发夹结构的底物探针在环上修饰有RNA碱基处断裂,切割断裂底物探针后,DNAzyme被释放,继续与下一个底物探针结合并切割,利用DNAzyme可循环反复催化裂解底物的特性实现循环反应。底物探针被切割断裂后,形成的Y字形探针可与信标探针结合并打开其发夹结构,产生荧光信号,同时在ExoⅢ的作用下降解,从3′端开始切割水解被打开的信标探针,释放出底物探针,继续与下一个信标探针结合切割,形成第二步的循环信号放大。经过两步的循环反应,荧光信号得到不断增强,从而达到高灵敏检测的目的。200μL反应体系在37℃反应60 min后,其荧光信号与Pb²⁺浓度在0.05～200 nmol/L范围内呈良好的线性关系,检出限为0.01 nmol/L。用于实际样品中Pb²⁺的检测,加标回收率为96.3%～108.3%。本方法具有简单、快速、高选择性、高灵敏的特点,在Pb

【文章来源】：分析化学. 2020,48(02)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

基于DNAzyme及Exo Ⅲ辅助循环放大策略构建的铅离子荧光传感器示意图

发夹结构的信标探针中碱基的杂交个数对于整个反应体系荧光信号的产生有重要影响,因此首先对信标探针序列进行了优化,结果见图3。信标探针中碱基杂交个数过多,会造成底物形成的Y型探针与之结合困难,荧光信号降低;信标探针碱基杂交个数较少,会造成整个体系的背景信号偏高。由图3可见,当信标探针中碱基杂交个数为12时结果最优。图3 信标探针碱基杂交个数优化

信标探针碱基杂交个数优化


本文编号：3034031