基于协同杂交反应的DNA荧光探针的研究

发布时间：2021-02-24 06:52

　　荧光探针技术由于操作简单,成本低及检测快速等优点,在各类核酸目标物的检测中应用。然而,待测目标物的含量往往很低,需要通过扩增技术,以实现高灵敏的测定。信号放大扩增策略通过分子扩增技术,可以用来检测酶活性、核酸和单碱基错配等多种物质,而DNA链置换反应就是信号放大的新机理之一。碱基错配的特异性识别,为疾病的诊断及治疗提供了重要的依据,若能够开发出对单个碱基错配具有特异性识别的探针,那将对医学界的疾病诊断提供一定的帮助。在本论文中,我们利用协同反应设计了一种信号放大的DNA链置换开关,构建了DNA碱基错配识别的探针,用于寡核苷酸和单碱基错配的识别。通过荧光和聚丙烯酰胺凝胶电泳验证了该探针的可行性与重现性。具体研究内容如下:（1）基于双目标响应的DNA链置换开关的研究:本章节利用协同反应,设计了一种基于双目标响应的DNA链置换开关。其原理是两条低浓度且序列不同的目标链,共同作用于探针的两端支点;然后发生协同杂交链置换反应,并释放出下一步链置换反应的支点域。通过荧光和凝胶电泳的表征手段,验证了该方法具有良好的可行性与重现性。我们对寡核苷酸不同支点长度的调节,验证了协同反应的可调控性,并表现出不... 

【文章来源】：湘潭大学湖南省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 单碱基错配
        1.1.1 单核苷酸多态性的产生
        1.1.2 单核苷酸多态性作为基因分型的原因
        1.1.3 单核苷酸多态性的方法与分类
        1.1.4 用单核苷酸多态性进行检测的方法
        1.1.5 单核苷酸多态性基因分型的应用
    1.2 链置换反应的原理及应用
        1.2.1 DNA和 RNA的检测
        1.2.2 蛋白质的检测
    1.3 DNA链置换信号循环放大的技术
        1.3.1 杂交链反应放大技术
        1.3.2 HCR实时监测
    1.4 选题思路及研究内容
第2章 基于双目标响应的DNA链置换开关的研究
    2.1 前言
    2.2 实验部分
        2.2.1 仪器与试剂
        2.2.2 荧光光谱测量
        2.2.3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 双目标驱动的信号循环放大反应机理
        2.3.2 合作支点杂交机制
        2.3.3 单边循环信号放大原理
    2.4 小结
第3章 基于双目标响应的DNA碱基错配的研究
    3.1 前言
    3.2 实验部分
        3.2.1 仪器与试剂
        3.2.2 荧光检测
        3.2.3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 实验原理
        3.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳验证机理
        3.3.3 探针比列的实时优化
        3.3.4 DNA目标链的浓度梯度实时监测
        3.3.5 不同碱基错配的荧光光谱测量
        3.3.6 DNA碱基错配的实时荧光监测
    3.4 小结
结论
参考文献
致谢
个人简历及在校期间发表的论文



本文编号：3048972