重组枯草芽孢杆菌全细胞催化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷

发布时间：2021-04-22 14:27

　　2-O-α-D-甘油葡糖苷是一种在食品、化妆品、保健品及医药领域有着重大应用前景的高附加值产品,但国内仍未实现2-O-α-D-甘油葡糖苷的工业化生产,且鲜有关于2-O-α-D-甘油葡糖苷合成的相关报道。文中旨在开发一种利用食品安全级重组枯草芽孢杆菌全细胞催化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的方法,通过构建一株异源表达肠膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶（Sucrose phosphorylase,SPase）的重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/pMA5-gtfA,并将其用作全细胞催化剂合成2-O-α-D-甘油葡糖苷,通过优化培养温度、时间及全细胞转化条件,提高其转化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的产量。结果表明,重组枯草芽孢杆菌B. subtilis 168/pMA5-gtfA在30℃下培养20 h,菌体裂解物酶活力最大达1.43 U/mL,并且在1 mol/L蔗糖、2.5 mol/L甘油、pH 7.0、菌体OD600为40、30℃下全细胞转化反应48h,共生成2-O-α-D-甘油葡糖苷189.3g/L,平均转化速率为15.6mmol/（L·h）,蔗糖转化率约为75.1%,... 

【文章来源】：生物工程学报. 2020,36(09)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 酶和试剂
        1.1.3 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 构建重组表达菌株
        1.2.3 Spase在大肠杆菌中的表达和纯化
        1.2.4 Spase在枯草芽孢杆菌中的表达
        1.2.5 酶活测定
        1.2.6 酶的最适温度的测定
        1.2.7 酶的最适p H的测定
        1.2.8 酶的温度稳定性的测定
        1.2.9 酶的p H稳定性的测定
2 结果与分析
    2.1 肠膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶基因gtf A的克隆与表达
    2.2 温度和p H对SPase酶活力和稳定性的影响
        2.2.1 温度对SPase酶活力和稳定性的影响
        2.2.2 p H对SPase酶活力和稳定性的影响
    2.3 SPase在枯草芽孢杆菌中的表达
    2.4 优化SPase在枯草芽孢杆菌中的表达
        2.4.1 培养温度的优化
        2.4.2 培养时间的优化
    2.5 重组菌B.subtilis 168/p MA5-gtf A全细胞转化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的条件优化
        2.5.1 温度对全细胞转化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的影响
        2.5.2 初始p H对全细胞转化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的影响
        2.5.3 菌体量对全细胞转化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的影响
        2.5.4 底物浓度对全细胞转化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的影响
    2.6 5 L发酵罐全细胞转化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]甘油葡萄糖苷的吸附分离方法研究[J]. 刘欣昱,吕雪峰,谈晓明.  青岛农业大学学报(自然科学版). 2015(04)
[2]ggpS基因过表达对集胞藻PCC 6803甘油葡萄糖苷和甘油合成的影响[J]. 马培珍,谈晓明,吕雪峰,田继远.  生物工程学报. 2016(03)
[3]蔗糖磷酸化酶制备及应用的研究进展[J]. 侯顾伟,马江锋,隋姗姗,姜岷,韦萍.  中国酿造. 2010(06)



本文编号：3153936