基于核酸适配体荧光法检测赭曲霉素A

发布时间：2017-04-24 04:02

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【摘要】：第一章：简单介绍了核酸适配体的定义和特点,赭曲霉素A(OTA)检测的重要性和常用的检测方法；综述了基于核酸适配体检测赭曲霉素A的不同方法；阐述了本论文的立题背景、研究内容及创新点。 第二章：利用核酸适配体荧光探针,基于荧光共振能量转移原理建立了一种检测赭曲霉素A的荧光分析方法。赭曲霉素A在375nm波长下激发,在430nm处可以发荧光,赭曲霉素A与标记有荧光素的核酸适配体结合后,两者之间可发生荧光共振能量转移,荧光素在518nm处的荧光强度增强。根据518nm处荧光强度的变化可实现对赭曲霉素A的检测。这种检测方法简单、快速、特异性强,检出限达到了1nmol/L。 第三章：利用荧光素标记的核酸适配体(FDNA)和荧光猝灭基团(BHQ)标记的互补寡聚核苷酸链(QDNA)建立了一种检测赭曲霉素A的荧光分析法。未加入赭曲霉素A时,标记有荧光素的核酸适配体与标记有猝灭基团的互补寡聚核苷酸链结合,荧光基团与猝灭基团靠近,导致荧光猝灭；当加入赭曲霉素A后,FDNA与赭曲霉素A高亲和力高特异性结合,荧光基团与猝灭基团远离,FDNA的荧光信号得到恢复。根据FDNA与目标物结合前后荧光强度的变化,可以实现对赭曲霉素A的定量检测。 第四章：利用赭曲霉素A本身的荧光特性,发展了一种通过荧光各向异性分析快速考察赭曲霉素A(OTA)与核酸适配体之间的相互作用的方法。赭曲霉素A与核酸适配体的特异性结合使分子体积增大,赭曲霉素A旋转变慢,引起荧光各向异性值增大。通过荧光各向异性分析考察了缓冲液成分中金属离子对适配体亲和力的影响,结果发现当Na+与Ca2+同时存在时赭曲霉素A与核酸适配体之间的亲和力明显增强,这与溶液中只有Ca2+时相比亲和力增大了18倍,当Ca2+不存在时适配体亲和力完全消失。另外,利用荧光各向异性方法研究了核酸适配体突变对亲和力的影响,对适配体亲和力起重要作用的碱基可以被鉴别出。建立了一种基于适配体检测OTA的荧光各向异性分析法,在缓冲液中固定适配体和OTA标准物的浓度,加入不同浓度的OTA待测物,OTA荧光各向异性值会随着待测物浓度的增加而降低,根据荧光各向异性值的变化可以实现对OTA的检测。 第五章：建立了一种采用单荧光基团标记的核酸适配体检测赭曲霉素A的方法。当标记有荧光基团的适配体与OTA结合时,荧光基团周围的环境发生变化,从而引起荧光强度的变化,根据荧光强度的变化实现对OTA的检测。考察了适配体不同位点上标记荧光素(包括T碱基,3’端,5’端)对适配体亲和力的影响,还考察了荧光素标记的适配体对OTA的响应性能。一些荧光素标记的核酸适配体在检测OTA时表现出信号增加或是降低的响应。采用荧光开关适配体,实现了对OTA的快速、有选择性的检测,在稀释后的红葡萄酒中也可以检测OTA,表明本方法可以实现复杂基质中OTA的检测。
【关键词】：核酸适配体 赭曲霉素A 荧光分析 荧光各向异性
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：O657.3
【目录】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 第一章 绪论14-34
• 1.1 引言14-15
• 1.2 赭曲霉素A检测方法研究进展15-25
• 1.2.1 核酸适配体介绍15-16
• 1.2.2 基于核酸适配体的赭曲霉素A的检测16-25
• 1.2.2.1 基于核酸适配体光学方法检测赭曲霉素A16-19
• 1.2.2.2 基于核酸适配体电化学方法检测赭曲霉素A19-24
• 1.2.2.3 基于核酸适配体检测赭曲霉素A的其他方法24-25
• 1.3 立题背景及主要研究内容25-26
• 1.4 创新点26-27
• 参考文献27-34
• 第二章 基于荧光共振能量转移的核酸适配体探针检测赭曲霉素A34-46
• 2.1 引言34-35
• 2.2 实验部分35-36
• 2.2.1 仪器与试剂35
• 2.2.2 荧光分析35
• 2.2.3 实验条件的优化35-36
• 2.2.4 赭曲霉素A的检测36
• 2.2.5 特异性实验36
• 2.2.6 回收率实验36
• 2.3 结果与讨论36-42
• 2.3.1 实验原理36-37
• 2.3.2 赭曲霉素A与FAM标记的适配体之间的FRET考察37
• 2.3.3 离子浓度的影响37-39
• 2.3.4 方法选择性的考察39-40
• 2.3.5 赭曲霉素A的检测40-41
• 2.3.6 红葡萄酒样品中赭曲霉素A的检测41-42
• 2.4 结论42
• 参考文献42-46
• 第三章 基于结构转换适配体荧光法检测赭曲霉素A46-58
• 3.1 引言46-47
• 3.2 实验部分47-48
• 3.2.1 仪器和试剂47
• 3.2.2 荧光分析47
• 3.2.3 实验条件的优化47-48
• 3.2.4 赭曲霉素A的检测48
• 3.2.5 特异性实验48
• 3.2.6 回收率实验48
• 3.3 结果与讨论48-55
• 3.3.1 实验原理48-49
• 3.3.2 离子浓度、pH值、Tween20的影响49-51
• 3.3.3 试剂加入顺序及温育温度的影响51-52
• 3.3.4 选择性的考察52-53
• 3.3.5 赭曲霉素A的检测53-54
• 3.3.6 复杂基质中赭曲霉素A的检测54-55
• 3.4 结论55
• 参考文献55-58
• 第四章 利用荧光各向异性分析研究赭曲霉素A与适配体之间的相互作用及对赭曲霉素A的检测58-80
• 4.1 引言58-59
• 4.2 实验部分59-60
• 4.2.1 仪器和试剂59
• 4.2.2 实验方法59-60
• 4.2.3 解离常数的测定60
• 4.3 结果与讨论60-75
• 4.3.1 赭曲霉素A与适配体之间相互作用的荧光各向异性分析60-62
• 4.3.2 阳离子对适配体亲和力的影响62-64
• 4.3.3 缓冲液pH对适配体亲和力的影响64-65
• 4.3.4 解离常数的测定65-69
• 4.3.4.1 亲和力的测定65
• 4.3.4.2 解离常数的测定65-66
• 4.3.4.3 不同缓冲液中解离常数的考察66-69
• 4.3.5 适配体碱基突变对亲和力的影响69-72
• 4.3.6 采用荧光各向异性法检测赭曲霉素A72-75
• 4.3.6.1 荧光各向异性法检测赭曲霉素A72-73
• 4.3.6.2 复杂基质中赭曲霉素A的检测73-75
• 4.4 结论75-76
• 参考文献76-80
• 第五章 利用单荧光基团标记的核酸适配体检测赭曲霉素A80-94
• 5.1 引言80
• 5.2 实验部分80-82
• 5.2.1 仪器和试剂80-81
• 5.2.2 荧光分析81-82
• 5.3 结果与讨论82-89
• 5.3.1 实验原理82
• 5.3.2 适配体标记位点的筛选82-84
• 5.3.3 适配体对赭曲霉素A的荧光响应84-88
• 5.3.4 检测方法的选择性考察88
• 5.3.5 复杂基质中赭曲霉素A的检测88-89
• 5.4 结论89
• 参考文献89-94
• 攻读学位期间取得的研究成果94-95
• 致谢95-96
• 个人简况及联系方式96-98

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 朱广华,郑洪,鞠q，

本文编号：323516