高灵敏酪氨酸酶和碱性磷酸酶活性分析方法的构建及应用
发布时间：2021-07-30 07:12
酪氨酸酶（TYR）作为含铜氧化酶,可催化酪胺或酪氨酸氧化为多巴胺（DA）,并进一步氧化为多巴醌,从而引发黑色素的形成。黑色素在黑色素瘤的发展中起关键作用,且与多种疾病的诊断有重要关系。此外,DA作为重要的儿茶酚胺神经递质,在人体的多种组织中起重要作用。同时碱性磷酸酶（ALP）在很多病例中也发挥重要作用,其酶含量的异常水平可引起或预示很多疾病。因此,开发一种简单、迅速且灵敏的DA、TYR和ALP的新探测方法是非常重要的。本文采用荧光检测的方法,首先基于TYR对酚胺类物质的特异性反应,引入氧化剂来加速反应构建了一种简便且灵敏的DA和TYR检测方法。其次,构建了基于香豆素衍生物的TYR检测荧光探针和可发生ALP和TYR酶级联反应的新型近红外荧光探针。主要研究内容如下:（1）利用过氧化苯甲酰促进间苯二酚和DA之间的原位荧光反应,建立了简单、经济、高效、高选择性和高灵敏的DA浓度和TYR活性测定方法。将过氧化苯甲酰引入系统可促进DA氧化,从而实现与间苯二酚的更快反应以形成荧光物质。该测定法能够测量未标记的荧光读数,并且产物的荧光强度信号取决于DA的浓度和TYR的活性。在测定DA时,其浓度在4.0...
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
利用荧光g-C3N4纳米片检测ALP的无标记荧光分析的示意图
西北大学硕士学位论文4反应的进行，4-氨基萘酰亚胺在535nm处开始释放，而在467nm处由于氨基甲酸键的作用而逐渐熄灭（如图1.2）。因此，合成的探针显示比率荧光变化，用于TYR活性的定量分析[38]。图1.2TYR检测策略示意图1.3.3荧光共振能量转移(FRET)荧光共振能量转移是基于供体的激发态能量转移到具有较低能量激发态的受体的能力，前提是有一个匹配的受体激发态振动能级可用[37]。通常，只有当供体的发射光谱和受体的吸收光谱明显重叠，且供体和受体的相互距离足够近（1-10nm）时，才可能发生有效的FRET过程[39]。作为简单的荧光分析技术，FRET对分子间距离的纳米级变化非常敏感，适合于研究生物分子间的相互作用和构象变化，因而受到越来越多的关注[40]。Yang等人以F-PDA纳米粒为荧光供体，MnO2纳米粒为荧光受体形成FRET对，MnO2纳米粒以指数衰减的形式有效地猝灭了F-PDA纳米粒的荧光。同时，ALP能催化2-磷酸-L-抗坏血酸（AA2P）水解生成L-抗坏血酸（AA），使MnO2还原为Mn2+，并引发MnO2纳米片的分解，同时使F-PDA纳米颗粒荧光恢复（如图1.3），实现了无标记、低成本、直观且特异的ALP检测[41]。图1.3基于FRET的ALP检测用F-PDA-MnO2探针示意图
西北大学硕士学位论文4反应的进行，4-氨基萘酰亚胺在535nm处开始释放，而在467nm处由于氨基甲酸键的作用而逐渐熄灭（如图1.2）。因此，合成的探针显示比率荧光变化，用于TYR活性的定量分析[38]。图1.2TYR检测策略示意图1.3.3荧光共振能量转移(FRET)荧光共振能量转移是基于供体的激发态能量转移到具有较低能量激发态的受体的能力，前提是有一个匹配的受体激发态振动能级可用[37]。通常，只有当供体的发射光谱和受体的吸收光谱明显重叠，且供体和受体的相互距离足够近（1-10nm）时，才可能发生有效的FRET过程[39]。作为简单的荧光分析技术，FRET对分子间距离的纳米级变化非常敏感，适合于研究生物分子间的相互作用和构象变化，因而受到越来越多的关注[40]。Yang等人以F-PDA纳米粒为荧光供体，MnO2纳米粒为荧光受体形成FRET对，MnO2纳米粒以指数衰减的形式有效地猝灭了F-PDA纳米粒的荧光。同时，ALP能催化2-磷酸-L-抗坏血酸（AA2P）水解生成L-抗坏血酸（AA），使MnO2还原为Mn2+，并引发MnO2纳米片的分解，同时使F-PDA纳米颗粒荧光恢复（如图1.3），实现了无标记、低成本、直观且特异的ALP检测[41]。图1.3基于FRET的ALP检测用F-PDA-MnO2探针示意图
【参考文献】：
期刊论文
[1]FRET-based ratiometric fluorescent detection of arginine in mitochondrion with a hybrid nanoprobe[J]. Yueyue Li,Yanan Ban,Ruihui Wang,Zheng Wang,Zhanxian Li,Chenjie Fang,Mingming Yu. Chinese Chemical Letters. 2020(02)
[2]长光程薄层紫外-可见光谱电化学法测定多巴胺[J]. 吴霖生,崔华,晋冠平,林祥钦. 分析化学. 2000(05)
本文编号：3310961
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
利用荧光g-C3N4纳米片检测ALP的无标记荧光分析的示意图
西北大学硕士学位论文4反应的进行，4-氨基萘酰亚胺在535nm处开始释放，而在467nm处由于氨基甲酸键的作用而逐渐熄灭（如图1.2）。因此，合成的探针显示比率荧光变化，用于TYR活性的定量分析[38]。图1.2TYR检测策略示意图1.3.3荧光共振能量转移(FRET)荧光共振能量转移是基于供体的激发态能量转移到具有较低能量激发态的受体的能力，前提是有一个匹配的受体激发态振动能级可用[37]。通常，只有当供体的发射光谱和受体的吸收光谱明显重叠，且供体和受体的相互距离足够近（1-10nm）时，才可能发生有效的FRET过程[39]。作为简单的荧光分析技术，FRET对分子间距离的纳米级变化非常敏感，适合于研究生物分子间的相互作用和构象变化，因而受到越来越多的关注[40]。Yang等人以F-PDA纳米粒为荧光供体，MnO2纳米粒为荧光受体形成FRET对，MnO2纳米粒以指数衰减的形式有效地猝灭了F-PDA纳米粒的荧光。同时，ALP能催化2-磷酸-L-抗坏血酸（AA2P）水解生成L-抗坏血酸（AA），使MnO2还原为Mn2+，并引发MnO2纳米片的分解，同时使F-PDA纳米颗粒荧光恢复（如图1.3），实现了无标记、低成本、直观且特异的ALP检测[41]。图1.3基于FRET的ALP检测用F-PDA-MnO2探针示意图
西北大学硕士学位论文4反应的进行，4-氨基萘酰亚胺在535nm处开始释放，而在467nm处由于氨基甲酸键的作用而逐渐熄灭（如图1.2）。因此，合成的探针显示比率荧光变化，用于TYR活性的定量分析[38]。图1.2TYR检测策略示意图1.3.3荧光共振能量转移(FRET)荧光共振能量转移是基于供体的激发态能量转移到具有较低能量激发态的受体的能力，前提是有一个匹配的受体激发态振动能级可用[37]。通常，只有当供体的发射光谱和受体的吸收光谱明显重叠，且供体和受体的相互距离足够近（1-10nm）时，才可能发生有效的FRET过程[39]。作为简单的荧光分析技术，FRET对分子间距离的纳米级变化非常敏感，适合于研究生物分子间的相互作用和构象变化，因而受到越来越多的关注[40]。Yang等人以F-PDA纳米粒为荧光供体，MnO2纳米粒为荧光受体形成FRET对，MnO2纳米粒以指数衰减的形式有效地猝灭了F-PDA纳米粒的荧光。同时，ALP能催化2-磷酸-L-抗坏血酸（AA2P）水解生成L-抗坏血酸（AA），使MnO2还原为Mn2+，并引发MnO2纳米片的分解，同时使F-PDA纳米颗粒荧光恢复（如图1.3），实现了无标记、低成本、直观且特异的ALP检测[41]。图1.3基于FRET的ALP检测用F-PDA-MnO2探针示意图
【参考文献】：
期刊论文
[1]FRET-based ratiometric fluorescent detection of arginine in mitochondrion with a hybrid nanoprobe[J]. Yueyue Li,Yanan Ban,Ruihui Wang,Zheng Wang,Zhanxian Li,Chenjie Fang,Mingming Yu. Chinese Chemical Letters. 2020(02)
[2]长光程薄层紫外-可见光谱电化学法测定多巴胺[J]. 吴霖生,崔华,晋冠平,林祥钦. 分析化学. 2000(05)
本文编号：3310961
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/huaxue/3310961.html
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