高速逆流色谱分离纯化麻黄、苍白秤钩风、钩吻和蟾酥中活性成分的研究

发布时间：2017-04-28 03:06

  本文关键词：高速逆流色谱分离纯化麻黄、苍白秤钩风、钩吻和蟾酥中活性成分的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本文对高速逆流色谱(High-Speed Counter-Current Chromatography, HSCCC)在中药活性成分分离纯化中的应用进行研究,建立麻黄、苍白秤钩风、钩吻和蟾酥中的活性成分分离纯化的高速逆流色谱方法,为从中药材中快速、高效地分离纯化出活性成分提供新的方法借鉴,同时为中药药效成分标准物的快速制备和新药的研究与开发提供技术支撑。 方法：采用硅胶柱色谱法和高速逆流色谱法(High-Speed Counter-Current Chromatography, HSCCC)分离纯化麻黄中的黄酮类成分；利用HSCCC分离苍白秤钩风中的蜕皮甾酮类成分；采用pH-区带精制逆流色谱法(pH-zone-refining counter-current chromatography)制备钩吻中的吲哚类生物碱；利用HSCCC结合制备性高效液相色谱(Preparative High Performance Liquid Chromatography, pre-HPLC)的方法分离纯化蟾酥中的蟾蜍二烯羟酸内酯类化合物。利用HPLC测定分离所得到的所有化合物的纯度,并利用质谱(MS)与核磁共振波谱(NMR)等技术对其化学结构进行鉴定。 结果：从麻黄中分离得到2个双黄酮和2个黄酮,鉴定为麻黄宁A、麻黄宁D、二氢槲皮素和儿茶素,纯度都大于98%；从苍白秤钩风中分离得到3个蜕皮甾酮类化合物,鉴定为paristerone、ecdysterone和capitasterone,纯度均大于98%；从钩吻中制备分离到6个吲哚类生物碱单体,鉴定为19-oxo-gelsenicine、gelsemine、 koumine、11-methoxygelsemamide、gelsenicine和humantenine,纯度均大于95%；从蟾酥中分离得到8个蟾蜍二烯羟酸内酯类化合物,鉴定为沙蟾毒精、蟾毒它灵、19-氧代华蟾毒精、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾毒精、脂蟾毒配基和嚏根草配基-3-辛二酸半酯,纯度均大于96%。 结论：高速逆流色谱通过采用各种类型的溶剂系统,能实现从微克、上百毫克到数克量级的分析分离和制备纯化。由于逆流色谱不使用固态载体,从而避免了因不可逆吸附导致的样品损失、失活与变性等,特别适合用于天然产物有效成分的分离。
【关键词】：高速逆流色谱 麻黄 苍白秤钩风 钩吻 蟾酥
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R284.2;O657.7
【目录】：

• 提要3-4
• Abstract4-10
• 引言10-12
• 第一部分 文献综述12-26
• 1. 中药有效成分的提取新方法12-15
• 1.1 超声辅助提取技术12-13
• 1.2 微波辅助萃取技术13
• 1.3 超临界流体萃取技术13-14
• 1.4 动态连续逆流提取14
• 1.5 动态循环阶段连续逆流提取14
• 1.6 酶工程技术14-15
• 1.7 半仿生提取法15
• 2. 中药有效成分的分离新方法15-18
• 2.1 分子蒸馏技术15-16
• 2.2 膜分离技术16
• 2.3 分子印迹分离技术16-17
• 2.4 超临界流体色谱17
• 2.5 高效毛细管电泳法17
• 2.6 免疫亲和色谱17
• 2.7 生物色谱法17-18
• 2.8 高速逆流色谱18
• 3. 高速逆流色谱法简介18-26
• 3.1 高速逆流色谱的起源18
• 3.2 高速逆流色谱的工作原理18-19
• 3.3 高速逆流色谱溶剂体系的选择19
• 3.4 影响高速逆流色谱分离的因素19-20
• 3.5 高速逆流色谱的优势20
• 3.6 高速逆流色谱的特殊技术20-21
• 3.7 高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用21-26
• 第二部分 高速逆流色谱分离纯化麻黄中的黄酮类化合物26-33
• 1. 引言26-27
• 2. 实验部分27-28
• 2.1 仪器与材料27
• 2.2 样品制备27
• 2.3 溶剂体系的选择27
• 2.4 两相溶剂体系及样品溶液的制备27-28
• 2.5 HSCCC分离过程28
• 2.6 HPLC分析及结构鉴定28
• 3. 结果与讨论28-32
• 3.1 HPLC条件的优化28
• 3.2 HSCCC溶剂体系的优化28-30
• 3.3 HSCCC分离组分的结构鉴定30-32
• 4. 结论32-33
• 第三部分 高速逆流色谱分离纯化苍白秤钩风中的33-39
• 1. 引言33-34
• 2. 实验部分34-35
• 2.1 仪器与材料34
• 2.2 样品制备34
• 2.3 溶剂体系的选择34
• 2.4 两相溶剂体系及样品溶液的制备34-35
• 2.5 HSCCC分离过程35
• 2.6 HPLC分析及结构鉴定35
• 3. 结果与讨论35-38
• 3.1 HPLC条件的优化35
• 3.2 HSCCC溶剂体系的优化35-37
• 3.3 HSCCC分离组分的结构鉴定37-38
• 4. 结论38-39
• 第四部分 pH-区带精制逆流色谱制备钩吻中的生物碱39-47
• 1. 引言39-40
• 2. 实验部分40-41
• 2.1 仪器与材料40
• 2.2 样品制备40
• 2.3 两相溶剂体系及样品溶液的制备40
• 2.4 pH-区带精制逆流色谱分离过程40-41
• 2.5 HPLC分析及结构鉴定41
• 3. 结果与讨论41-46
• 3.1 HPLC条件的优化41
• 3.2 pH-区带精制逆流色谱溶剂体系的优化41-43
• 3.3 pH-区带精制逆流色谱分离组分的结构鉴定43-46
• 4. 结论46-47
• 第五部分 高速逆流色谱结合制备高效液相色谱分离纯化蟾酥中的蟾蜍二烯羟酸内酯类化合物47-56
• 1. 引言47-48
• 2. 实验部分48-50
• 2.1 仪器与材料48-49
• 2.2 样品制备49
• 2.3 溶剂体系的选择49
• 2.4 两相溶剂体系及样品溶液的制备49
• 2.5 HSCCC分离过程49-50
• 2.6 prep-HPLC的进一步纯化过程50
• 2.7 HPLC分析及结构鉴定50
• 3. 结果与讨论50-55
• 3.1 HPLC条件的优化50
• 3.2 HSCCC溶剂体系的优化50-53
• 3.3 化合物的结构鉴定53-55
• 4. 结论55-56
• 第六部分 本研究的创新点56-57
• 第七部分 结语57-58
• 参考文献58-69
• 附录69-77
• 致谢77-78
• 论文著作78-93
• 详细摘要93-97

【参考文献】

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本文编号：331979