新型反相/强阴离子交换混合模式材料用于磷酸化肽富集

发布时间：2021-12-10 11:19

　　建立了新型反相/强阴离子交换混合模式材料（C18/SAX）的磷酸化肽富集方法。考察了流动相组成（乙腈浓度、甲酸浓度、缓冲盐浓度）对酪蛋白（α-Casein）酶解液中磷酸化肽分离选择性的影响。实验结果表明,磷酸化肽在C18/SAX上的保留行为受疏水和离子交换作用力的共同调控,单磷酸化肽先于多磷酸化肽从材料上洗脱出来。随着甲酸浓度增加,磷酸化肽的保留减弱;随着盐浓度增加,磷酸化肽保留变小。采用优化后的流动相,建立以20%ACN/20 mmol/L NH4Ac作为上样溶液,20%ACN/0.1%FA和50%ACN/100 mmol/L NH4Ac/2%FA分别作为洗脱液分段洗脱单、多磷酸化肽的方法。以α-Casein和人血清白蛋白（HSA）酶解液的混合溶液（1∶20,n/n）作为模拟样品,实现了单、多磷酸化肽的同时富集和分段洗脱,分别检测到4条单磷酸化肽和14条多磷酸化肽的信号。将本方法用于牛奶中的磷酸化肽检测,共鉴定到4条单磷酸化肽和8条多磷酸化肽信号。结果表明,本富集方法选择性高,有良好的应用前景。 

【文章来源】：分析化学. 2017,45(01)北大核心EISCICSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

流动相中乙腈浓度对肽段在C18/SAX材料上保留的影响结果

0.2983（2+）*797.8428(2+)*830.4337(2+)880.4390*924.3406（2+）A1312.4336（2+）*×4983.3186(2+)*964.8286(2+)*×4*692.8423*748.3442*964.3121（2+）***976.4339（2+）1029.4451（3+）1159.0270m/zm/zm/z1267.66671383.6730图2流动相中酸度对磷酸化肽在C18-SAX材料上富集的影响。50%ACN/0．1%FA(A)，50%ACN/0.5%FA(B)，50%ACN/1%FA(C)和50%ACN/2%FA(D)，*标记为磷酸化肽，其它为非磷酸化肽Fig．2InfluenceofformicacidcontentinmobilephaseonselectiveenrichmentofphosphopeptideonC18/SAXmatrix．50%ACN/0．1%FA(A)，50%ACN/0．5%FA(B)，50%ACN/1%FA(C)and50%ACN/2%FA(D)．Peaksmarkedwith*arephosphopeptides，andothersarenon-phosphopeptidesm/z964．31(2+)，m/z983．28(2+)，m/z1002．26(2+)，m/z1339．95(2+)，m/z1373．91(2+)。这是因为在离子交换作用下，多磷酸化肽比单磷酸化肽在C18/SAX上的保留更强，提高流动相盐浓度能够减弱PO3!4与C18/SAX材料的离子交换作用。上述结果表明，盐浓度的逐渐增高能够实现单、多磷酸化肽分段洗脱，溶液中盐浓度提高到100mmol/LNH4Ac时，大多数多磷酸化肽能够被洗脱。3．4C18/SAX材料的富集选择性将α-Casein酶解液-HSA酶解液(1∶20，n/n)配制的混合样品溶液作为模拟样品，以20%ACN/0．1%FA和50%ACN/2%FA/100mmol/LNH4Ac分别作为两步洗脱条件，分段洗脱单磷酸化肽和多磷酸?

718(2+)1339.9998(2+)B×4m/z100806040200Intensity（%）65070075080085090095010001050110011501200125013001350140014501500696.6146797.8559(2+)*****814.3614830.8867(2+)880.4716899.4460924.6929(2+)976.9856(2+)1044.4189A749.7885m/z100806040200图4α-Casein和HSA(1∶20，mol/mol)混合酶解液经C18-SAX富集后再洗脱的质谱图。A，20%ACN/0．1%FA洗脱;B，50%ACN/2%FA/100mMNH4Ac洗脱。*标记为磷酸化肽，其它为非磷酸化肽Fig．4Enrichmentofmixtureofα-CaseinandHSAdigests(1∶20，mol/mol)．A，Eluentby20%ACN/0．1%FAaqueoussolution;B，Eluentby50%ACN/2%FA/100mmol/LNH4Acaqueoussolution．Peaksmarkedwith*arephosphopeptides，andothersarenon-phosphopeptides．00分析化学第45卷

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3532520