新型荧光试剂的开发及其在食品中氨基化合物分析中的应用
发布时间：2022-01-17 05:58
氨基酸作为一种重要的生命物质,广泛存在于生物体内,同时氨基酸还是各种食品中不可缺少的营养物质,影响着这些产品的味道、香气和颜色,并且具有很复杂的生物学功能,然而,一些食品添加剂、防腐剂以及食品包装材料的使用导致了在食品中出现了多种具有致癌性质的氨基污染物,因此开发高灵敏度且高选择性的分析方法监测这些物质对于研究食品与人体健康之间的关系是至关重要的。高效液相色谱技术因其分辨率高,灵敏度高,通用性强和样品处理简单的优点一直是食品与卫生安全领域分析中最常用的检测技术之一,而受限于多数氨基化合物没有发光性质,开发高灵敏度的标记试剂一直是研究的重中之重,另外,食品中氨基化合物的复杂性和多样性也对不同氨基化合物的选择性检测提出了更高的要求。本研究的重点在于设计与合成新型的荧光试剂用于标记氨基化合物并开发选择性强,灵敏度高的分析方法用于食品中不同氨基化合物的检测,具体内容如下:第一章:简述了食品中常见的氨基化合物,氨基化合物常用的分析技术,用于标记氨基的衍生化试剂的研究现状,选题意义及本论文主要工作。第二章:设计与合成了新型的荧光标记试剂4-（咔唑-9-基）-苄基氯甲酸酯（CBBC-Cl）并进行了结...
【文章来源】：曲阜师范大学山东省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-（咔唑-9-基）-苄基氯甲酸酯（CBBC-Cl）的合成路线图
第2章新型荧光标记试剂CBBC-Cl用于茶叶中氨基酸的高效液相色谱分析硼酸盐缓冲液中，并通过0.45μm尼龙过滤器过滤，最后用硼酸盐缓冲液将浓度稀释至1.0μg/mL，并将其置于4°C的冰箱中以待分析。2.2.6衍生化反应衍生化反应如图2-2所示，反应在乙腈/水（1：1）碱性介质溶液中进行，简而言之，将20μL氨基酸标准溶液，200μL硼酸盐缓冲液，50μL衍生试剂溶液和200μL乙腈依次加入2mL安瓿瓶中，将小瓶密封并振荡30s，以使混合物在室温下反应6min，最后通过添加30μL淬灭剂终止衍生化反应，在通过0.45μm尼龙膜过滤后，将样品直接（10μL）注入仪器中进行HPLC-FLD分析。图2-2CBBC-Cl与氨基酸的衍生化程序：（a）单取代；（b）双取代2.2.7色谱质谱参数表2-1流动相组成及梯度洗脱程序时间流动相A%流动相B%流动相C%流动相D%065350010604000204555002817830028.51708303600100037009010420080205000010055000100流动相A为ACN/H2O（35/65）含有20mmol醋酸盐缓冲液（pH3.7）流动相A为ACN/H2O（60/40）含有20mmol醋酸盐缓冲液（pH3.7）流动相C为ACN/H2O（60/40）；流动相D为100%ACN在反相HypersilBDS-C18色谱柱（250×4.6mm，5μm，Agilent）上于30°C以1.0mL/min的流速进行色谱分离，流动相和梯度洗脱程序见表2-1，荧光波长设置为λex/λem10
第2章新型荧光标记试剂CBBC-Cl用于茶叶中氨基酸的高效液相色谱分析＝292/370nm。MS参数如下：雾化器压力：60psi，干气温度：350°C，干气流：5.0L/min，ESI蒸气温度：350°C，电晕电流：4000nA，毛细电压：3500V。2.3结果与讨论2.3.14-（咔唑-9-基）-苄醇（CBBC-OH）的紫外吸收在这项研究中，我们实验室合成了用于制备CBBC-Cl的中间产物4-（咔唑-9-基）-苄醇（CBBC-OH），其结构与苄基咔唑衍生物非常相似。在200-600nm的扫描范围内，在乙腈，乙醇，甲醇和1,4-二恶烷等不同溶剂中测定了CBBC-OH溶液（1.5×10-5mol/L）的最大吸收波长，吸光度（A）和摩尔吸收系数（）。如表2-2所示，在乙腈溶液中观察到最大吸收波长为292nm，相应的摩尔吸收系数（）为2.04×104L/mol/cm，与文献报道的FMOC衍生物的摩尔吸收系数（1.7×104L/mol/cm）相比，CBBC-OH的摩尔吸收系数约强1.2倍[51]。我们认为这是由于在CBBC-Cl分子的核心结构上加入了一个叔氮原子连接的苯环，这进一步增强了整个分子的共轭结构。表2-24-（咔唑-9-基）-苄醇（CBBC-OH）的紫外吸收溶剂吸光度（A）摩尔吸收系数（）337nm326nm292nm229nmA（×104）A（×104）A（×104）A（×104）乙腈0.2961.480.3011.500.4092.040.2911.45乙醇0.2741.370.2791.390.4002.000.2831.41甲醇0.2521.260.2671.330.3611.800.2471.231,4-二恶烷0.2411.200.2561.280.2841.422.3.24-（咔唑-9-基）-苄醇（CBBC-OH）的荧光性质图2-3CBBC-OH的最大发射波长11
【参考文献】：
期刊论文
[1]普洱茶发酵过程中不同添加物对茶褐素及其形成机制的影响[J]. 龚加顺,陈一江,彭春秀,周红杰. 茶叶科学. 2010(02)
本文编号：3594175
【文章来源】：曲阜师范大学山东省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-（咔唑-9-基）-苄基氯甲酸酯（CBBC-Cl）的合成路线图
第2章新型荧光标记试剂CBBC-Cl用于茶叶中氨基酸的高效液相色谱分析硼酸盐缓冲液中，并通过0.45μm尼龙过滤器过滤，最后用硼酸盐缓冲液将浓度稀释至1.0μg/mL，并将其置于4°C的冰箱中以待分析。2.2.6衍生化反应衍生化反应如图2-2所示，反应在乙腈/水（1：1）碱性介质溶液中进行，简而言之，将20μL氨基酸标准溶液，200μL硼酸盐缓冲液，50μL衍生试剂溶液和200μL乙腈依次加入2mL安瓿瓶中，将小瓶密封并振荡30s，以使混合物在室温下反应6min，最后通过添加30μL淬灭剂终止衍生化反应，在通过0.45μm尼龙膜过滤后，将样品直接（10μL）注入仪器中进行HPLC-FLD分析。图2-2CBBC-Cl与氨基酸的衍生化程序：（a）单取代；（b）双取代2.2.7色谱质谱参数表2-1流动相组成及梯度洗脱程序时间流动相A%流动相B%流动相C%流动相D%065350010604000204555002817830028.51708303600100037009010420080205000010055000100流动相A为ACN/H2O（35/65）含有20mmol醋酸盐缓冲液（pH3.7）流动相A为ACN/H2O（60/40）含有20mmol醋酸盐缓冲液（pH3.7）流动相C为ACN/H2O（60/40）；流动相D为100%ACN在反相HypersilBDS-C18色谱柱（250×4.6mm，5μm，Agilent）上于30°C以1.0mL/min的流速进行色谱分离，流动相和梯度洗脱程序见表2-1，荧光波长设置为λex/λem10
第2章新型荧光标记试剂CBBC-Cl用于茶叶中氨基酸的高效液相色谱分析＝292/370nm。MS参数如下：雾化器压力：60psi，干气温度：350°C，干气流：5.0L/min，ESI蒸气温度：350°C，电晕电流：4000nA，毛细电压：3500V。2.3结果与讨论2.3.14-（咔唑-9-基）-苄醇（CBBC-OH）的紫外吸收在这项研究中，我们实验室合成了用于制备CBBC-Cl的中间产物4-（咔唑-9-基）-苄醇（CBBC-OH），其结构与苄基咔唑衍生物非常相似。在200-600nm的扫描范围内，在乙腈，乙醇，甲醇和1,4-二恶烷等不同溶剂中测定了CBBC-OH溶液（1.5×10-5mol/L）的最大吸收波长，吸光度（A）和摩尔吸收系数（）。如表2-2所示，在乙腈溶液中观察到最大吸收波长为292nm，相应的摩尔吸收系数（）为2.04×104L/mol/cm，与文献报道的FMOC衍生物的摩尔吸收系数（1.7×104L/mol/cm）相比，CBBC-OH的摩尔吸收系数约强1.2倍[51]。我们认为这是由于在CBBC-Cl分子的核心结构上加入了一个叔氮原子连接的苯环，这进一步增强了整个分子的共轭结构。表2-24-（咔唑-9-基）-苄醇（CBBC-OH）的紫外吸收溶剂吸光度（A）摩尔吸收系数（）337nm326nm292nm229nmA（×104）A（×104）A（×104）A（×104）乙腈0.2961.480.3011.500.4092.040.2911.45乙醇0.2741.370.2791.390.4002.000.2831.41甲醇0.2521.260.2671.330.3611.800.2471.231,4-二恶烷0.2411.200.2561.280.2841.422.3.24-（咔唑-9-基）-苄醇（CBBC-OH）的荧光性质图2-3CBBC-OH的最大发射波长11
【参考文献】：
期刊论文
[1]普洱茶发酵过程中不同添加物对茶褐素及其形成机制的影响[J]. 龚加顺,陈一江,彭春秀,周红杰. 茶叶科学. 2010(02)
本文编号：3594175
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/huaxue/3594175.html
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