基于免疫侧向层析检测食用油中辣椒碱的方法

发布时间：2022-02-21 11:35

　　合格的食用油中是不会含有辣椒碱,而地沟油大部分都是餐饮废弃油,如果在烹饪过程中加入了辣味调料等物质,尤其是牛油火锅中,则油脂中一定会有辣椒碱物质的存在。因为辣椒碱的自身具备的一些特性例如亲脂、稳定和沸点高,这些特性决定了即使精炼地沟油也很难分离出辣椒碱,因此可以将辣椒碱作为鉴别食用油是否为地沟油的特异性指标。因此,本文建立了三种不同的免疫侧向层析法来检测食用油中的辣椒碱:（1）传统型免疫侧向层析试纸食用油中辣椒碱检测方法的建立本方法的原理在于毛细管侧向层析和抗原抗体免疫识别相结合,利用抗体可以通过静电吸附与纳米金粒子表面偶联结合,NC膜上的C线上固定羊抗鼠二抗,T线上固定辣椒碱抗原,一般通过NC膜上T线和C线是否显色来判断食用油中辣椒碱的存在情况,同时与灰度扫描结果结合来对辣椒碱的含量进行定量分析。在可行性研究的基础上优化金纳米粒子与抗体偶联量、偶联p H、重悬液、样品垫处理液和上样稀释缓冲液,得出最佳实验方案,并检测传统型辣椒碱试纸条的特异性和灵敏度。在最佳实验条件下,可以在10 min内完成对辣椒碱含量的检测。肉眼观察试纸条的灵敏度为100μg/L,标准曲线检测线性范围为10-10... 

【文章来源】：合肥工业大学安徽省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 辣椒碱的理化性质及其检测的意义
    1.2 胶体金纳米粒子在免疫侧向层析中的应用
    1.3 时间分辨荧光免疫层析分析技术的应用
    1.4 地沟油检测鉴别的国内外现状
        1.4.1 国外地沟油的研究现状
        1.4.2 国内地沟油的研究现状
    1.5 论文研究内容及意义
第二章 胶体金免疫侧向层析食用油中辣椒碱检测方法建立
    2.1 胶体金免疫侧向层析辣椒碱检测原理
    2.2 实验主要试剂材料和设备
        2.2.1 主要试剂材料
        2.2.2 主要设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 实验所需缓冲液及处理液配制
        2.3.2 金纳米粒子的制备
        2.3.3 辣椒碱抗体与金纳米粒子偶联成功的表征
        2.3.4 免疫侧向层析试纸的制备
        2.3.5 实际样品食用油脂中辣椒碱的检测步骤
        2.3.6 金纳米粒子与辣椒碱单克隆抗体偶联
        2.3.7 胶体金免疫侧向层析试纸反应体系优化
        2.3.8 特异性检测
        2.3.9 试纸条的检测与标准曲线建立
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 金纳米粒子制备及与抗体偶联表征结果
        2.4.2 金纳米粒子与辣椒碱抗体偶联量优化试纸结果
        2.4.3 偶联时碳酸钾添加量优化试纸结果
        2.4.4 偶联后重悬液种类优化试纸结果
        2.4.5 样品垫处理液成分的优化
        2.4.6 上样稀释缓冲液的优化
        2.4.7 特异性检测试纸结果
        2.4.8 试纸条的检测与标准曲线建立
    2.5 小结
第三章 改良型免疫侧向层析辣椒碱检测方法建立
    3.1 改良型免疫侧向层析食用油中辣椒碱检测原理
    3.2 实验主要试剂材料和设备
        3.2.1 主要试剂材料
        3.2.2 主要设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 金纳米粒子与抗体偶联量优化
        3.3.2 金纳米粒子与抗体偶联时封闭物的优化
        3.3.3 金纳米粒子与辣椒碱抗体偶联重悬液优化
        3.3.4 96孔板微孔中金纳米粒子与抗体偶联物滴加量的优化
        3.3.5 96孔板微孔中冷冻干燥物与待测液预孵育时间的优化
        3.3.6 试纸条的检测与标准曲线建立
        3.3.7 改良型试纸条实际样品的检测
        3.3.8 改良型试纸条实际样品的估量检测
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 金纳米粒子与抗体偶联量优化
        3.4.2 金纳米粒子与抗体偶联时封闭物的优化
        3.4.3 金纳米粒子与辣椒碱抗体偶联重悬液优化
        3.4.4 96孔板微孔中金纳米粒子与抗体偶联物滴加量的优化
        3.4.5 96孔板微孔中冷冻干燥物与待测液预孵育时间的优化
        3.4.6 改良型试纸条的检测与标准曲线建立
        3.4.7 改良型试纸条实际样品的检测
        3.4.8 改良型试纸条实际样品的估量检测
    3.5 小结
第四章 基于时间分辨荧光微球标记的免疫侧向层析食用油中辣椒碱检测方法建立
    4.1 时间分辨荧光微球免疫侧向层析食用油中辣椒碱检测原理
    4.2 实验主要试剂材料和设备
        4.2.1 主要试剂材料
        4.2.2 主要设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 主要试剂的配制
        4.3.2 时间分辨荧光微球与辣椒碱单克隆抗体偶联
        4.3.3 基于时间分辨荧光委屈的免疫侧向层析试纸反应体系优化
        4.3.4 特异性检测
        4.3.5 试纸条的检测与标准曲线建立
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 基于时间分辨荧光委屈的免疫侧向层析试纸反应体系优化
    4.5 小结
第五章 结论与展望
参考文献
攻读硕士学位期间的学术活动及成果清单


【参考文献】：
期刊论文
[1]液相色谱-串联质谱法检测食用油中辣椒碱类化合物[J]. 薛瑾,孙彦敏,张金秋,陶飞,徐春祥.  食品安全质量检测学报. 2018(22)
[2]利用液相-质谱法检测食用油中辣椒素的分析与探讨[J]. 张昆娴.  食品安全导刊. 2018(20)
[3]基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法检测猪霍乱沙门氏菌[J]. 黄震,夏诗琪,刘道峰,刘成伟,赖卫华.  分析化学. 2017(02)
[4]胶体金在地沟油快速检测中的创新应用[J]. 季晓锋,陈花蕊.  化学教育. 2016(21)
[5]超声辅助提取辣椒中辣椒素的分析与研究[J]. 李俞洁,曾令浩,区硕俊.  当代化工. 2016(10)
[6]地沟油的分析鉴别方法分析[J]. 陈丽花,郝德兰,朱楚楚,荣玉芝,李彬,张艺娇.  食品安全导刊. 2016(27)
[7]液相色谱-同位素稀释质谱法检测食用油中辣椒碱类化合物[J]. 国振,李秀琴,高方园,张庆合,李红梅.  化学试剂. 2016(06)
[8]选择离子流动管质谱法测定油脂中的呋喃[J]. 黄雪松,王超,段翰英.  食品安全质量检测学报. 2015(12)
[9]地沟油鉴别检测方法研究进展[J]. 王嵬,刘连利,仪淑敏.  食品安全质量检测学报. 2015(01)
[10]地沟油鉴别技术的研究进展[J]. 陈明东,卢健斌,姜逸竹,李敏.  安徽农业科学. 2015(01)

硕士论文
[1]改良型免疫侧向层析瘦肉精莱克多巴胺检测新方法研究[D]. 宋清.合肥工业大学 2019
[2]基于时间分辨荧光免疫层析快速定量检测降钙素原（PCT）试剂的研究[D]. 邵向阳.南方医科大学 2018
[3]改进型免疫侧向层析三聚氰胺检测方法研究[D]. 钟友好.合肥工业大学 2017



本文编号：3637171