利用荧光技术研究DinG和RecD2解旋酶与DNA的相互作用

发布时间：2022-05-08 20:38

　　由于生物学反应的复杂性,传统的体相检测技术可以检测到反应过程的总体变化,但很难对生物反应的分子过程和瞬时状态进行直观的检测。近些年来兴起并逐渐成熟的单分子技术包括单分子荧光共振能量转移、磁镊等提高了人们实时研究生物大分子行为和机理的能力;本文利用体相和单分子荧光技术研究蛋白质和DNA相互作用过程和机制,我们可以全面地了解到生物反应的过程,极大地增强了人们理解复杂生命过程的能力。含有铁-硫团簇大肠杆菌的Din G蛋白（Ec Din G）能够使Cy3荧光染料发生淬灭,但具体机理不太清楚。通过加入氧化剂过氧化氢、还原剂DTT探究铁-硫团簇和Cy3之间可能发生的电子转移,证明了Cy3淬灭可作为研究解旋酶与DNA具体运动的特异性和灵敏探针。核酸是遗传信息的载体,由脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）组成,已知所有生物体的生命活动都离不开核酸的转录、复制、翻译等一系列反应,而这其中需要解旋酶打开核酸间的氢键。一旦解旋过程出现问题,生物体将出现疾病而不能正常生存,因此研究和理解解旋酶解旋不同核酸结构的解旋行为和潜在的机制尤为重要。细胞在受到外部条件干扰时,核酸结构很容易遭到破坏。耐辐射奇球菌具... 

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 解旋酶
        1.2.1 解旋酶简介
        1.2.2 解旋酶性质
    1.3 DNA荧光修饰
    1.4 G4结构DNA
        1.4.1 G4结构DNA的研究方法
    1.5 选题背景与科学意义
    参考文献
第二章 实验技术与方法
    2.1 引言
    2.2 荧光和荧光寿命测试
    2.3 全内反射荧光显微镜
        2.3.1 全内反射荧光显微镜基本原理
        2.3.2 全内反射荧光显微镜基本应用
    2.4 磁性镊子
    2.5 FRET技术
    参考文献
第三章 FeS团簇与荧光标记DNA相互作用光学性质的研究
    3.1 引言
    3.2 实验准备
        3.2.1 DNA底物的制备
    3.3 实验过程
    3.4 实验结果
    3.5 小结
    参考文献
第四章 DrRecD2蛋白对DNA解旋行为机制的研究
    4.1 引言
    4.2 实验准备
        4.2.1 反应小室的制备
        4.2.2 蛋白质表达和纯化
        4.2.3 DNA制备
    4.3 实验过程
        4.3.1 单分子荧光共振能量转移数据采集
        4.3.2 磁镊数据采集
        4.3.3 圆二色性(CD)的表征
    4.4 实验结果
        4.4.1 DrRecD2解旋较短链长DNA
        4.4.2 DrRecD2解旋较长链长DNA
        4.4.3 DrRecD2解旋G4结构DNA
    4.5 小结
    参考文献
第五章 工作总结与展望
缩略词表
攻读学位期间发表的学术论文目录
致谢



本文编号：3652335