亲水色谱质谱联用技术在天然产物中的分析方法和应用研究

发布时间：2017-05-16 17:15

  本文关键词：亲水色谱质谱联用技术在天然产物中的分析方法和应用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：天然产物的组成成分复杂，极性各异，含量差异大。其中，强极性成分是天然产物中一类重要组分，表现出多种活性特征。强极性活性成分的分析表征方法研究对天然产物的开发和质量控制具有重要意义。目前，色谱-质谱（LC-MS）联用技术在天然产物的分析和质量控制方面发挥了重要作用，但传统的反相液相色谱法（RP-HPLC）对强极性成分保留能力不强，分离度较差，其在质量控制中表现出明显的不足。亲水色谱法（HILIC）是二十世纪九十年代提出的一种新的色谱分离技术，其主要特点是使用极性固定相，流动相是水（强洗脱溶剂）和有机溶剂，特别适用于强极性成分的分离，流动相中含有高比例的乙腈，与电喷雾质谱联用（ESI-MS）离子化效率较高。HILIC目前广泛应用于蛋白组学、代谢组学、环境科学等前沿领域，用于食品药品质量控制方面的文章较少，而有关亲水色谱-电喷雾质谱联用技术（HILIC-ESI/MS）在天然产物中强极性成分的分析和质量控制方面的研究较少。基于此，本研究对HILIC-ESI/MS在几种药食两用的天然产物（如：桑叶、大枣、丹参）中强极性活性成分的分析表征和质量控制方法方面的研究进行了初步探索，主要在以下几方面进行了研究： 首先，以桑叶为样品，采用超声波辅助提取，HILIC分析桑叶中黄酮类成分的含量，建立10批山东产地的桑叶的指纹图谱，，有17个共有峰，4个峰特征峰，电喷雾飞行时间质谱分析结合文献定性4种成分，相似度分析表明10种桑叶相似度均在0.900以上，而另外2种不同产地的桑叶相似度在0.900以下，因此，实验建立的桑叶HILIC指纹图谱法可用于不同产区桑叶样品的初步鉴别。 其次，以5个品种的大枣为样品，超声提取，HILIC法测定大枣中核苷酸含量，使用聚类分析建立18批次大枣样品的指纹图谱。结果表明：采用超声提取法，大枣中核苷类成分提取率较高；HILIC比目前使用最广的高效液相色谱（HPLC）灵敏度高；采用ESI-TOF/MS技术结合标准对照品可以对核苷类成分进行准确鉴别，得到的大枣样品中9种核苷酸含量比以往文献报道中的高；枣中核苷酸种类很多，但含量差异很大，能同时测量多种核苷酸含量的方法或研究鲜见报道，本实验建立的方法能满足大枣核苷酸种类多、含量差异大的要求，同时测定其中9种核苷酸的含量；采用基于HILIC法的核苷指纹结合聚类分析可以实现不同品种大枣的初步区分。 最后，采用超高压提取法，建立了山东产区丹参酚酸类成分的HILIC特征指纹图谱方法，通过与标准品的对比，定量了丹参中9种酚酸类成分。研究表明：超高压提取丹参酚酸类成分提取率优于超声、加热回流的提取效果；本实验建立的方法能满足丹参酚酸类成分含量差异大要求，能同时准确鉴定丹参7种酚酸类成分；采用本研究发展的丹参酚酸类成分亲水色谱特征指纹图谱结合相似度分析可以用于丹参产地的初步区分。 本研究对天然产物中强极性成分的提取分析和质量控制研究提供了方法和技术上的支持，并且进一步拓展了HILIC-ESI/MS在天然产物分析中的应用范围。
【关键词】：天然产物 亲水色谱 液质联用 指纹图谱 桑叶 大枣 丹参
【学位授予单位】：山东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：TS201.2;O657.7
【目录】：

• 目录4-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 第一章 文献综述11-19
• 1 前处理方法11-13
• 1.1 超声波辅助萃取法12
• 1.2 超高压提取技术12-13
• 2 分析方法13-17
• 2.1 高效液相色谱13-15
• 2.2 质谱15-16
• 2.3 色谱质谱联用16-17
• 3 质量控制方法-指纹图谱17-19
• 第二章 HILIC-ESI-MS 测定桑叶中黄酮类成分及指纹图谱研究19-32
• 1 引言19-20
• 2 实验材料试剂、仪器与设备20-21
• 2.1 实验材料20
• 2.2 试剂20-21
• 2.3 仪器与设备21
• 3 方法和步骤21-22
• 3.1 供试品溶液的制备21
• 3.2 亲水色谱条件21
• 3.3 电喷雾飞行时间质谱条件21-22
• 3.4 测定方法22
• 4 结果与讨论22-31
• 4.1 样品溶液制备方法优化22-23
• 4.2 色谱条件优化23-25
• 4.3 特征峰的指认25
• 4.4 方法学考察25-28
• 4.5 指纹图谱的确立与应用28-31
• 5 小结31-32
• 第三章 HILIC-ESI-MS 测定大枣中的核苷类成分及其指纹图谱研究32-44
• 1 引言32
• 2 实验仪器、试剂和材料32-33
• 2.1 实验仪器32-33
• 2.2 实验试剂33
• 2.3 实验材料33
• 3 方法和步骤33-35
• 3.1 供试品溶液的制备33-34
• 3.2 色谱条件34
• 3.3 电喷雾飞行时间质谱条件34
• 3.4 样品的测定34
• 3.5 标准曲线绘制34-35
• 4 结果与讨论35-43
• 4.1 超声提取方法的优化35-37
• 4.2 色谱条件的优化37-38
• 4.3 标准曲线和检出限38-39
• 4.4 方法学考察39-40
• 4.5 质谱结果40-41
• 4.6 不同产地样品的测定41-42
• 4.7 指纹图谱的建立42-43
• 5 小结43-44
• 第四章 UHPE-HILIC-ESI-MS 测定丹参中酚酸类成分及其指纹图谱研究44-60
• 1 引言44
• 2 实验材料、试剂及仪器44-46
• 2.1 实验材料44-45
• 2.2 试剂45
• 2.3 仪器与设备45-46
• 3 方法和步骤46-47
• 3.1 供试品溶液的制备46
• 3.2 色谱条件46
• 3.3 质谱条件46-47
• 4 结果和讨论47-59
• 4.1 提取方法的优化47-49
• 4.2 色谱条件优化49-53
• 4.3 方法学考察53-55
• 4.4 指纹图谱的确立与应用55-59
• 5 小结59-60
• 第五章 总结60-61
• 参考文献61-66
• 攻读学位期间发表论文情况66-67
• 致谢67

【参考文献】

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本文编号：371453