菜豆环氧水解酶归一性水解间硝基环氧苯乙烷的研究

发布时间：2023-02-16 10:48

　　旨在研究菜豆环氧水解酶PvEH2对映归一性水解外消旋(rac-)间硝基环氧苯乙烷(mNSO)的特性,为制备光学纯(R)-间硝基苯乙二醇(mNPED)提供优良的生物催化剂。构建表达有重组PvEH2的工程茵E.coli/pveh2。以rac-mNSO为底物,借助手性色谱法分析E.coli/pveh2全细胞的EH活性和区域选择性。基于有机助溶剂种类和剂量对酶活性的影响,筛选并优化缓冲液/助溶剂反应体系。结果显示,在菜豆植株中,PvEH2基因的转录水平可能受体外环境诱导因素的影响。E.colil/pveh2的EH活性为15.4 U/g_干细胞,水解反应的区域选择性系数α_s和β_R分别为90.3%和96.4%。在经过筛选优化的含有5%(V/V)丙三醇的磷酸盐缓冲液中,最高底物浓度为40 mmol/L,是原缓冲液体系的4倍。当反应至12h时,所得(R)-mNPED的光学纯度ee_p及产率分别为84.9%和90.2%。E.coli/pveh2或PvEH2在水解rac-mNSO中表现出优秀的区域选择性,在制备光学纯(R)...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株、质粒和培养基
        1.1.2 试剂盒与工具酶
    1.2 方法
        1.2.1 基因扩增
        1.2.2 基因表达
        1.2.3 细胞EH活性的测定
        1.2.4 区域选择性系数的测定
        1.2.5 缓冲液体系中的归一性水解反应
        1.2.6 助溶剂种类与剂量的筛选
        1.2.7 缓冲液/助溶剂体系中的归一性水解反应
2 结果
    2.1 Pv EH2基因的生物信息学分析
    2.2 全细胞EH活性与SDS-PAGE检测结果
    2.3 E.coli/pveh2针对rac-m NSO的对映归一性水解
        2.3.1 E.coli/pveh2的区域选择性
        2.3.2 缓冲液体系中底物浓度对转化率的影响
        2.3.3 底物助溶剂对全细胞EH活性的影响
        2.3.4 缓冲液/丙三醇体系中的归一性水解
3 讨论
4 结论



本文编号：3744052