重组大肠杆菌表达17β-羟基类固醇脱氢酶全细胞催化合成宝丹酮的研究

发布时间：2023-05-20 04:58

　　宝丹酮作为一种重要的蛋白同化雄性激素类固醇,具有提升肌肉质量和耐力的功能。宝丹酮的传统合成方法是以1,4-雄烯二酮(ADD)为底物通过化学法合成,但过程复杂、污染严重。17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD)可催化甾体化合物C-17位点的氧化还原反应,实现ADD和宝丹酮的相互转化。本研究通过基因序列同源性分析,筛选到6种不同来源的17β-HSD基因并对其在大肠杆菌中进行异源表达。利用不同重组菌转化ADD合成宝丹酮,结果表明重组菌BL21/pET28a-HSDPy的ADD转化率最高,因此选择BL21/pET28a-HSDPy进行进一步研究。鉴定了重组菌的酶学性质并优化其全细胞转化条件。结果表明在生物量为36 g·L^-1、底物浓度为5.40 g·L^-1条件下,经过两次补料,获得了3.66g·L^-1宝丹酮,比优化前提高了4.1倍。而且在生物转化过程中未检测到副产物。为生物合成宝丹酮提供了可能。

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【文章目录】：
引言
1 实验材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 基因、引物、质粒和菌株
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
        1.1.4 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 重组质粒的构建
        1.2.2 17β-HSD在大肠杆菌中的表达和纯化
        1.2.3 17β-HSD酶活性测定和酶学性质分析
        1.2.4 重组菌株BL21/pET28a-HSD对ADD的全细胞转化
        1.2.5 分析方法
2 实验结果与讨论
    2.1 17β-羟基类固醇脱氢酶基因的筛选
    2.2 重组17β-HSD的构建表达和活性分析
    2.3 重组酶HSDPy的酶学性质分析
    2.4 重组大肠杆菌BL21/pET28a-HSDPy转化ADD生产宝丹酮
3 结论



本文编号：3820585