双马来酰亚胺标记质谱定量法及其在细胞凋亡酶-3活性检测中的应用
发布时间：2023-06-02 04:04
随着蛋白质组学与生命科学研究的飞速发展,相关分析与检测技术越来越得到研究者们的重视。其中,质谱分析技术因其高通量和可精确定量等特性而成为蛋白质组学研究中不可或缺的工具。作为蛋白质组学研究的一个重要内容,巯基翻译后修饰因其与许多疾病如肿瘤、神经退行性疾病等的密切联系而受到广泛关注,针对它的质谱定量技术也是一个非常活跃的研究领域,在生命科学领域扮演着越来越重要的角色。本论文将介绍相关研究背景以及我们在含巯基的多肽质谱定量技术研究中所做得努力,具体工作主要有以下两方面:一、发展了一种新的标记定量方法用于含巯基的半胱氨肽相对与绝对定量分析。所选用的两种化学结构相似的标记物N-甲基马来酰亚胺(NMM)与N-乙基马来酰亚胺(NEM)可以通过迈克尔加成反应特异性的标记巯基。这种反应快速,高灵敏,高特异性,并且可以在温和的反应条件下进行。由于化学结构的微小差异,这种技术无论在相对还是绝对定量模式下都能提供可靠的定量结果。并且,这种方法可以对几乎所有含巯基的多肽及其它生物分子进行高灵敏检测,绝对定量检测极限可达纳摩尔浓度数量级,且可对复杂的蛋白质酶解液进行标记定量。与传统的同位素试剂盒相比,试剂成本几乎...
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 巯基翻译后修饰与质谱技术简介
1.1.1 巯基翻译后修饰的分类及其生物学意义
1.1.2 巯基亚硝基化修饰水平的检测方法
1.1.3 质谱技术简介
1.2 定量蛋白质组学及其应用
1.2.1 定量蛋白质组学基本概念与在生物领域中的应用
1.2.2 常用的质谱标记定量方法概述
1.2.3 非同位素标记内标定量法
1.3 细胞凋亡酶-3及其活性检测
1.3.1 细胞凋亡酶-3简介
1.3.2 细胞凋亡酶-3活性检测的生物学意义
1.3.3 常见的酶活性检测方法
1.4 质谱技术在酶活性检测中的应用
1.4.1 MALDI质谱在酶活性检测中的应用
1.4.2 其它质谱技术在酶活性检测中的应用
1.5 本研究课题的选题依据
参考文献
第二章 基于双马来酰亚胺标记技术的半胱氨肽相对和绝对定量法
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 实验仪器与试剂
2.2.1.1 实验仪器
2.2.1.2 实验试剂
2.2.2 半胱氨肽的选择性标记
2.2.3 标记效率的测定
2.2.4 标记反应的动态范围
2.2.5 半胱氨肽相对和绝对定量
2.2.6 复杂背景下的定量稳定性装与蛋白样品的富集
2.2.7 含有半胱氨酸的蛋白质酶解组装与蛋白样品的富集
2.2.8 MALDI-TOF分析
2.3 实验结果与讨论
2.3.1 设计策略
2.3.2 半胱计策氨肽的特异性标记
2.3.3 标记反应条件优化
2.3.4 标记效率和灵敏度
2.3.5 比值测定的可重复性
2.3.6 半胱氨肽的绝对定量
2.3.7 半胱氨肽相对定量
2.3.8 含半胱氨酸蛋白的相对定量
2.4 小结
参考文献
第三章 双马来酰亚胺标记定量法在细胞凋亡酶-3活性检测中的应用
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 实验仪器及试剂
3.2.1.1 实验仪器
3.2.1.2 实验试剂
3.2.2 多肽酶活性质谱探针的制备
3.2.3 多肽探针的酶切反应及酶特异性检测
3.2.4 体外酶活性检测与抑制剂筛选
3.2.5 细胞裂解液中的酶活性检测
3.3 实验结果讨论
3.3.1 多肽酶活性质谱探针的制备
3.3.2 双马来酰亚胺标记定量法在Caspase-3酶活性检测中的应用
3.3.3 体外酶活性检测与抑制剂筛选
3.3.4 细胞裂解液中的酶活性检测
3.4 小结
参考文献
第四章 结论与展望
4.1 结论
4.2 展望
硕士期间发表的论文和专利
致谢
本文编号：3827628
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 巯基翻译后修饰与质谱技术简介
1.1.1 巯基翻译后修饰的分类及其生物学意义
1.1.2 巯基亚硝基化修饰水平的检测方法
1.1.3 质谱技术简介
1.2 定量蛋白质组学及其应用
1.2.1 定量蛋白质组学基本概念与在生物领域中的应用
1.2.2 常用的质谱标记定量方法概述
1.2.3 非同位素标记内标定量法
1.3 细胞凋亡酶-3及其活性检测
1.3.1 细胞凋亡酶-3简介
1.3.2 细胞凋亡酶-3活性检测的生物学意义
1.3.3 常见的酶活性检测方法
1.4 质谱技术在酶活性检测中的应用
1.4.1 MALDI质谱在酶活性检测中的应用
1.4.2 其它质谱技术在酶活性检测中的应用
1.5 本研究课题的选题依据
参考文献
第二章 基于双马来酰亚胺标记技术的半胱氨肽相对和绝对定量法
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 实验仪器与试剂
2.2.1.1 实验仪器
2.2.1.2 实验试剂
2.2.2 半胱氨肽的选择性标记
2.2.3 标记效率的测定
2.2.4 标记反应的动态范围
2.2.5 半胱氨肽相对和绝对定量
2.2.6 复杂背景下的定量稳定性装与蛋白样品的富集
2.2.7 含有半胱氨酸的蛋白质酶解组装与蛋白样品的富集
2.2.8 MALDI-TOF分析
2.3 实验结果与讨论
2.3.1 设计策略
2.3.2 半胱计策氨肽的特异性标记
2.3.3 标记反应条件优化
2.3.4 标记效率和灵敏度
2.3.5 比值测定的可重复性
2.3.6 半胱氨肽的绝对定量
2.3.7 半胱氨肽相对定量
2.3.8 含半胱氨酸蛋白的相对定量
2.4 小结
参考文献
第三章 双马来酰亚胺标记定量法在细胞凋亡酶-3活性检测中的应用
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 实验仪器及试剂
3.2.1.1 实验仪器
3.2.1.2 实验试剂
3.2.2 多肽酶活性质谱探针的制备
3.2.3 多肽探针的酶切反应及酶特异性检测
3.2.4 体外酶活性检测与抑制剂筛选
3.2.5 细胞裂解液中的酶活性检测
3.3 实验结果讨论
3.3.1 多肽酶活性质谱探针的制备
3.3.2 双马来酰亚胺标记定量法在Caspase-3酶活性检测中的应用
3.3.3 体外酶活性检测与抑制剂筛选
3.3.4 细胞裂解液中的酶活性检测
3.4 小结
参考文献
第四章 结论与展望
4.1 结论
4.2 展望
硕士期间发表的论文和专利
致谢
本文编号：3827628
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