高容量温敏亲和色谱对抗体的分离纯化研究

发布时间：2023-10-27 19:57

　　抗体在癌症治疗和免疫诊断中起着重要作用,抗体药物作为新一代抗肿瘤药物有着广阔的市场。目前,蛋白A亲和层析(Protein A affinity chromatography)是用于抗体纯化最常用的色谱技术平台,但其存在配体造价高昂、重复使用性差、洗脱条件苛刻等问题,一定程度上制约了抗体行业的发展。近年来,聚酰胺-胺树枝状大分子(Poly amidoamine,PAMAM)在生物医药和免疫吸附中的应用越来越多,已证明将树枝状大分子用作间隔臂是提高配基密度和吸附容量的有效手段。而基于温敏聚合物开发的温敏色谱(Temperature-responsive affinity chromatography,TRAC)则可在纯水作为流动相的条件下,通过响应温度变化调节填料表面的亲疏水性质,实现对目标物有效分离和提纯。基于此,本论文将树枝状聚合物和温敏色谱的特点相结合,制备了一种用于抗体分离纯化高容量温敏亲和色谱介质,使用纯水作流动相,仅通过改变温度,以更温和的方式(40℃上样,5℃洗脱,p H 8.0)实现了抗体蛋白的分离纯化,并且大大提高吸附容量。分离过程绿色环保,高效安全,克服了当前抗体纯化过...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 前言
    1.2 抗体简介
        1.2.1 抗体的结构、分类和功能
        1.2.2 抗体的生产制备
    1.3 抗体的分离纯化
        1.3.1 蛋白A亲和色谱
        1.3.2 混合模式色谱
        1.3.3 疏水电荷诱导色谱
        1.3.4 短肽仿生亲和色谱
        1.3.5 其它色谱方法
    1.4 树枝状大分子
    1.5 刺激响应性聚合物
    1.6 温敏色谱
        1.6.1 温敏亲和色谱
        1.6.2 温敏色谱的应用
    1.7 本论文的研究意义和研究内容
    参考文献
第二章 高容量温敏亲和色谱固定相的制备和表征
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 试剂
        2.2.2 仪器
        2.2.3 高容量温敏亲和色谱固定相的制备
        2.2.4 材料表征
        2.2.5 色谱柱的装填
        2.2.6 抗体蛋白保留行为的测试
        2.2.7 抗体蛋白保留特征的测试
        2.2.8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 材料的表征
        2.3.2 高容量温敏亲和色谱对IgG的分离纯化
        2.3.3 温度对抗体蛋白保留的影响
        2.3.4 盐浓度对抗体蛋白保留的影响
        2.3.5 洗脱pH对抗体蛋白保留的影响
    2.4 本章小结
    参考文献
第三章 高容量温敏亲和色谱吸附性能研究及实际样品应用
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 试剂
        3.2.2 仪器
        3.2.3 蛋白吸附动力学测定
        3.2.4 蛋白吸附等温线测定
        3.2.5 蛋白吸附特征的测试
        3.2.6 温敏亲和色谱介质的重复使用性
        3.2.7 人血清和鸡蛋黄的预处理
        3.2.8 色谱柱的装填
        3.2.9 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 吸附动力学
        3.3.2 温度对吸附性能的影响
        3.3.3 盐浓度对吸附性能的影响
        3.3.4 pH值对吸附性能的影响
        3.3.5 温敏亲和色谱固定相的吸附选择性
        3.3.6 温敏亲和色谱固定相的重复使用性
        3.3.7 对实际样品的分离特征
    3.4 本章小结
    参考文献
结论与展望
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢



本文编号：3857171