基于毛细管柱的固定化多酶微反应器的制备与应用

发布时间：2023-12-10 16:32

　　固定化酶微反应器(IMER)是将酶的固定化与微通道内酶促反应相结合而得到的一类酶反应装置。IMER兼具酶的特异性催化、固定化酶的优点和微通道反应的低试剂消耗等优势,为生物医学、蛋白质组学和药学研究等创造了更多可能性。近年来,基于毛细管柱的IMER可与毛细管电泳(CE)进行联用(CE-IMER),结合CE分析速度快、试剂消耗少以及分离模式多等优势,在酶分析领域显示出巨大的潜力。针对如何实现毛细管柱的多酶固定化以及提高IMER的催化效率、稳定性和重复使用性等性能,发展IMER的制备方法是至关重要的。论文采取DNA定向固定化技术(DDI)将模型酶固定于用聚酰胺胺树状大分子(PAMAM)修饰的毛细管内壁,利用DNA双链的互补作用,构建一种可调控的双酶固定化开管式IMER。并且将该微反应器与CE联用应用于葡萄糖的检测和酶抑制剂的筛选,证明此方法具有推广于生物分析领域的可行性。(1)采用两组不同的DNA链分别与葡萄糖氧化酶(GOx)和辣根过氧化物酶(HRP)锚定,然后通过DDI技术将两种DNA-酶复合物共固定在由PAMAM修饰的毛细管内壁,构建一种基于毛细管柱的新型双酶固定化开管式IMER。PAM...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 毛细管电泳
        1.1.1 毛细管电泳的原理
        1.1.2 毛细管电泳的特点
    1.2 固定化酶微反应器
        1.2.1 固定化酶技术
        1.2.2 多酶固定化
        1.2.3 固定化酶微反应器
    1.3 毛细管电泳-固定化酶微反应器在酶分析方面的应用
        1.3.1 酶反应动力学研究
        1.3.2 酶抑制剂筛选
    1.4 DNA定向固定化技术
    1.5 课题提出与研究内容
第二章 基于DNA定向固定化技术的开管式毛细管固定化多酶微反应器的制备及其应用
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 实验过程
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 OT-IMER的表征
        2.3.2 OT-IMER酶解条件的探究
        2.3.3 OT-IMER的动力学研究
        2.3.4 OT-IMER的可逆性考察
        2.3.5 OT-IMER的稳定性和重复使用性
        2.3.6 不同氨基化方法对OT-IMER酶解效果的影响
        2.3.7 葡萄糖检测
    2.4 小结
第三章 基于DNA定向固定化技术的在线模式毛细管固定化多酶微反应器的制备及其应用
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 实验试剂
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 实验过程
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 在线模式CE-IMER酶分析效果考察
        3.3.2 在线模式CE-IMER酶分析条件的优化
        3.3.3 CE-IMER在抑制剂分析中的应用
    3.4 小结
第四章 结论
参考文献
研究成果及其发表的学术论文
    第一作者发表的论文
    与他人合作发表的论文
致谢
作者及导师简介
附件



本文编号：3872725