超速离心-沉降速率法测定蛋白质分子量的实验条件

发布时间：2024-04-20 09:58

　　分子量是蛋白质的重要特征参数,准确测定蛋白质分子量对研究蛋白质结构与功能具有重要意义。该文以牛血清蛋白(BSA)和人血清免疫球蛋白(IgG)为研究对象,采用分析超速离心-沉降速率法(AUC-SV)测定2种蛋白的分子量,并系统研究了样品初始浓度、离心转速、离心时间、离心温度、样品上样体积和缓冲液体系等实验条件对测定结果的影响。结果表明:离心转速为20 000～40 000 r/min时,影响不明显,样品初始浓度、离心时间、离心温度、缓冲液体系的适宜范围较宽,样品上样体积对测定结果的影响显著。在优化的实验条件下,测得未知蛋白的分子量为39.9 kDa,与质谱法测定结果(40.0 kDa)一致。该方法具有适宜条件范围宽、非破坏性、无需标准品和普适性高等优点,适用于未知蛋白分子量的测定。此外,相关研究结论还可供AUC-SV初学者学习借鉴。

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【部分图文】：

图1未知蛋白质分子量测定结果

在上述优化的实验条件下，以PBS为缓冲体系，测定未知蛋白质的分子量，并与质谱测定结果进行比较，如图1所示，表示蛋白质浓度c分布与沉降系数s分布的对应关系。AUC-SV法和MALDI-TOF/TOF质谱法测得该蛋白质分子量分别为39.9kDa（图1(a)）和40.0kDa（图1....

本文编号：3959247