一例pH实时监控荧光探针设计及作用机制研究

发布时间：2017-08-15 11:31

  本文关键词：一例pH实时监控荧光探针设计及作用机制研究

  更多相关文章： 荧光探针 溶酶体 肿瘤 pH 青蒿琥酯

【摘要】：细胞内pH值在调节各种生理活动中发挥着重要的作用,因此,实时监控pH值的变化具有重要意义。相比于传统检测方法,荧光检测具有操作简单、灵敏度高、稳定性好等优点,加之现代医学、分子生物学的发展和各种先进的荧光检测技术及仪器,荧光探针技术日益成为荧光成像、基因诊断、医疗诊断等领域非常重要的研究手段。溶酶体是细胞中一种酸性亚细胞器,其pH的变化与溶酶体的功能息息相关。微环境的酸度与肿瘤的生长、入侵和转移密切相关,因此,对溶酶体和肿瘤组织成像并且监控其pH变化具有重要意义。本文设计合成了一例可用于实时监控活体pH变化的荧光探针RA,该探针在pH 4.25和7.20之间具有很好的可逆循环性,不仅能定位溶酶体,实时监控青蒿琥酯(ART)、氯喹(CQ)以及地塞米松(DEX)诱导过程中细胞溶酶体pH的变化。该探针还能对卵巢癌肿瘤成像,证明了肿瘤组织的酸性环境,同时根据该探针在癌细胞和正常细胞中荧光强度的不同,推测其可以用于区分正常细胞和癌细胞,为癌症的检测和治疗提供重要的信息。对于氯喹和地塞米松诱导溶酶体pH变化的研究有很多,而关于青蒿琥酯对细胞溶酶体作用的报道很少。本文设计合成了三例染料E、B、N,分别用于标记ART得到AE、AB、AN。通过4种测试手段对AE、AB、AN进行比较：首先,AE、AB、AN与E、B、N的光谱性质基本没有差异,随后通过与Lyso Tracker Red进行细胞复染实验,用荧光的手段证明了ART聚集在细胞溶酶体内。酶水解测试说明AE与AB容易发生水解,而AN基本不被分解,加之其较低的细胞毒性,因此AN比较适合用于研究ART对细胞溶酶体的作用。
【关键词】：荧光探针 溶酶体 肿瘤 pH 青蒿琥酯
【学位授予单位】：大连理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O657.3
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 绪论8-28
• 1.1 细胞内pH值的测定9-11
• 1.1.1 弱酸弱碱分布法9
• 1.1.2 核磁共振法9-10
• 1.1.3 微电极法10
• 1.1.4 荧光探针法10-11
• 1.2 pH荧光探针研究进展11-26
• 1.2.1 溶酶体pH探针11-19
• 1.2.2 线粒体pH探针19-23
• 1.2.3 肿瘤pH探针23-26
• 1.2.4 其他pH探针26
• 1.3 论文设计思想及研究内容26-28
• 2 实时监控活体内pH的荧光探针28-56
• 2.1 引言28-29
• 2.2 实验部分29-34
• 2.2.1 实验仪器与试剂29
• 2.2.2 探针分子的合成29-30
• 2.2.3 探针分子的性能测试30-34
• 2.3 结果与讨论34-55
• 2.3.1 RA对H~+的响应机理34-35
• 2.3.2 RA的体外光谱性质和对H+的选择性35-39
• 2.3.3 RA对活细胞的毒性测试39-40
• 2.3.4 RA在活细胞中的成像40-44
• 2.3.5 RA实时监控细胞溶酶体pH的变化44-49
• 2.3.6 RA在SPF小鼠体内成像49-52
• 2.3.7 RA对移植有HeLa和HL-7702小鼠成像52-53
• 2.3.8 RA对卵巢癌肿瘤小鼠成像53-55
• 2.4 本章小结55-56
• 3 荧光修饰对青蒿琥酯诱导溶酶体作用的影响56-71
• 3.1 引言56-57
• 3.2 实验部分57-62
• 3.2.1 实验仪器与试剂57
• 3.2.2 染料分子合成及青蒿琥酯(ART)的荧光修饰57-61
• 3.2.3 E、B、N及ART的荧光修饰AE、AB、AN性能测试61-62
• 3.3 结果与讨论62-70
• 3.3.1 E、B、N与AE、AB、AN的光谱性质比较62-64
• 3.3.2 E、B、N、AE、AB、AN在活细胞中的荧光成像64-65
• 3.3.3 E、B、N、AE、AB、AN溶酶体定位实验65-67
• 3.3.4 液相色谱分析AE、AB、AN酶水解率67-68
• 3.3.5 ART与AE、AB、AN以及A+E、A+B、A+N对细胞活性的差异68-70
• 3.4 本章小结70-71
• 结论71-72
• 参考文献72-79
• 附录A 化合物的谱图79-89
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况89-90
• 致谢90-91

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 张思佳;段小红;焦阳;周密;;细胞内pH值测定方法的研究进展[J];现代生物医学进展;2014年21期

2 陈巍;马会民;;检测活性氧物种的氧杂蒽类光学探针的研究进展[J];分析化学;2012年09期

3 黄婷;欧阳翰;史真;高勇;;基于off-on机理的罗丹明基金属离子荧光探针研究进展[J];厦门大学学报(自然科学版);2011年S1期

4 李娜;刘美玲;尹文婷;杨征;李剑利;史真;;罗丹明基“OFF-ON”型荧光探针研究的一些新进展[J];有机化学;2011年01期

5 丁友法;胃液pH对β-葡萄糖醛酸苷酶活性的影响[J];临床检验杂志;1993年03期

，

本文编号：677930