高效液相色谱法在中草药黄酮类化合物和水中有机磷农药分析中的应用研究

发布时间：2017-09-09 06:05

  本文关键词：高效液相色谱法在中草药黄酮类化合物和水中有机磷农药分析中的应用研究

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【摘要】：高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)具有高压、高效、高灵敏度、操作简单等优点,在现代分析领域如食品卫生、环境安全、石油化工、天然产物、生物工程等方面具有非常广泛的应用。高效液相色谱的分离原理是利用分析物在固定相上的吸附、解吸速率差异,色谱柱对不同分析物的保留时间不一样,使各成分依次流出色谱柱而达到分离的目的。在进行高效液相色谱分析之前,需要对分析样品进行适当的前处理,并且前处理的好坏直接影响检测的灵敏度和准确性。近年来,许多样品前处理技术被开发出来并用于实际样品的分析,绿色、简单、快速的前处理方法一直是广大研究者致力于发展的方向。本文由两部分构成:绪论部分和研究报告。第一部分绪论论述了高效液相色谱、中草药和样品前处理的发展和应用情况。第二部分研究报告建立了三味中药中黄酮和有机酸以及水样中有机磷农药残留的提取分离方法。1.高效液相色谱法同时分离石韦中绿原酸、槲皮素和山柰酚以甲醇作为萃取剂,建立超声波萃取-高效液相色谱法分离和测定石韦中绿原酸、槲皮素和山柰酚的方法。采用Phenomenex C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇和p H=3.0的冰醋酸混合溶液,设置梯度洗脱程序、1.0m L/min的流速、254 nm的紫外检测波长和35℃的柱温。结果三种化合物在0.00024~3.00μg(绿原酸)、0.000 16~2.00μg(槲皮素)、0.000 16~2.00μg(山柰酚)之间线性关系良好,相关系数r均为0.9999。绿原酸、槲皮素和山柰酚的最低检出限(S/N=3)依次为3.29、0.43、0.33 ng/m L,加标回收率分别为97.73%、98.07%、96.92%。本方法前处理简单、分析时间短、测定准确、灵敏度高,为石韦中绿原酸、槲皮素、山柰酚三种成分的分离和定量提供了实验依据。2.超声波辅助萃取-高效液相色谱测定翻白草中7种黄酮和有机酸基于超声波辅助萃取技术,利用高效液相色谱法分离和测定翻白草中的7种黄酮和有机酸(绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、槲皮素、柚皮素、山柰酚和芹菜素)。利用Phenomenex C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)完成绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、槲皮素、柚皮素、山柰酚和芹菜素的分离;流动相为甲醇-0.1%的乙酸水溶液,进行梯度洗脱;流速1.0 m L/min,紫外测定波长350 nm,柱温40℃。7在20 min内完成7种黄酮和有机酸的色谱分离,并且获得了满意的线性方程(r0.9995,n=7),样品的平均回收率为84.61%~104.06%(RSD小于4.77)。最终确定黄酮和有机酸的最佳提取条件为:用100倍量的80%甲醇溶液超声时间20 min。对翻白草样品的分析表明每0.1 g样品中含有:绿原酸12.15μg、咖啡酸6.0μg、金丝桃苷12.7μg、槲皮素10.8μg、柚皮素29.4μg、山柰酚6.1μg和芹菜素11.4μg。3.益母草中8种有效成分的超声提取和含量测定建立了益母草中丁香酸、阿魏酸、芦丁、大豆素、槲皮素、橙皮素、山柰酚和芹菜素8种有效成分黄酮和有机酸的超声提取和含量测定的方法。Inert Sustain C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱用于分离益母草中的8种有效成分;选用甲醇和p H=3.0的乙酸水溶液作为流动相梯度洗脱。流速大小为1.0 m L/min;定量分析波长为285 nm;柱温设置为35℃;进样体积20μL。在最优条件下8个成分达到完全分离,绘制的标准曲线具有良好的线性,相关系数均在0.999 1(n=7)以上。加标平均回收率(n=3)在89.93%~102.01%之间,相对标准偏差为1.17%~3.11%。实验表明本方法容易操作、分析速度快、准确,为中药益母草的质量控制提供了依据。4.固相萃取结合分散液液微萃取测定水样中的四种有机磷农药建立了水中四种有机磷农药(水胺硫磷、甲基对硫磷、三唑磷和杀螟硫鳞)的测定方法。样品水溶液依次用固相萃取和分散液液微萃取富集其中的目标分析物,处理得到的萃取溶液进行高效液相色谱分析。影响萃取效果的因素,包括洗脱溶剂种类和用量、样品溶液的流速、盐浓度、萃取溶剂的类型和用量、样品溶液p H值都进行了优化。实验结果表明甲醇作为洗脱溶剂、二氯乙烷作为萃取溶剂效果最佳。在优化的条件下,100 m L水样经过固相萃取富集目标物,用1 m L的甲醇作为洗脱剂。在样品加标实验中,获得了较高的富集因子和满意的回收率(大于86.9%),检测限为0.021-0.15μg/L。0.5μg/L的加标样品溶液的相对标准偏差在1.9-6.8%(n=5)之间。该方法操作简单、富集因子高和检测灵敏并且成功用于水中四种有机磷农药的测定。
【关键词】：高效液相色谱 超声辅助萃取 黄酮类化合物 有机磷农药
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O657.72
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 绪论10-24
• 1 高效液相色谱法概述10-11
• 2 中药的发展现状11-12
• 3 黄酮类化合物及其研究进展12-14
• 4 有机磷农药残留研究进展14-15
• 5 样品前处理技术15-22
• 6 课题研究的意义及主要内容22-24
• 第二章 高效液相色谱法同时分离石韦中绿原酸、槲皮素和山柰酚24-28
• 1 前言24
• 2 实验部分24
• 3 方法与结果24-27
• 4 讨论27-28
• 第三章 超声波辅助萃取-高效液相色谱测定翻白草中7种黄酮和有机酸28-36
• 1 前言28
• 2 实验部分28-29
• 3 结果与分析29-34
• 4 结论34-36
• 第四章 益母草中8种有效成分的超声提取和含量测定36-44
• 1 前言36
• 2 实验部分36-39
• 3 结果与分析39-42
• 4 结论42-44
• 第五章 固相萃取结合分散液液微萃取测定水样中的四种有机磷农药44-52
• 1 前言44-45
• 2 实验部分45-47
• 3 结果与讨论47-51
• 4 总结51-52
• 参考文献52-72
• 硕士期间发表的论文72-74
• 致谢74

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