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甜菜碱和四氢嘧啶提高Pseudomonas putida KT2440耐盐性的分子机理研究

发布时间:2016-11-12 11:32

  本文关键词:耐盐分胁迫的生物学机理及其基因工程研究进展,由笔耕文化传播整理发布。


《南京农业大学》 2005年

甜菜碱和四氢嘧啶提高Pseudomonas putida KT2440耐盐性的分子机理研究

何健  

【摘要】:以模式菌株Pseudomonas putida KT2440为材料,研究了营养及各种环境条件对该菌株盐份渗透胁迫适应性的影响,探讨了外源添加各种相容性溶质提高KT2440对盐份渗透胁迫适应性及甜菜碱和四氢嘧啶对KT2440渗透胁迫保护机理。在此基础上对利用基因工程手段提高KT2440对盐份渗透胁迫适应性的可行性和策略进行了研究。研究结果表明(1)外源添加相容性溶质提高KT2440对盐份渗透胁迫适应性的机理在于盐份渗透胁迫时可以显著缩短KT2440的延滞期;显著降低这一时期KT2440细胞的死亡率。(2)盐份渗透胁迫时,KT2440对四氢嘧啶的快速积累是一种“临时性”的应急策略,当细胞适应渗透胁迫后会自身合成甜菜碱来代替四氢嘧啶;但如果KT2440基因组中甜菜碱合成基因被敲除,则KT2440细胞以四氢嘧啶作为细胞内主要的相容性溶质。利用转座插入突变获得了不能降解四氢嘧啶的突变株,并首次克隆到四氢嘧啶降解基因,发现四氢嘧啶降解阻断后,,四氢嘧啶对KT2440渗透保护效果没有明显的变化。(3)首次发现接种物培养液上清能提高KT2440对盐份渗透胁迫的适应性,上清中含有一定量的甜菜碱是产生渗透保护的主要因素。(4)采用全新的策略(使甜菜碱合成基因组成型表达,不受渗透压诱导),首次获得了一株对盐份渗透胁迫适应性显著提高的工程菌株KT2440dgbtbet。 Pseudomonas putida KT2440对盐份渗透胁迫适应性受到各种因素如营养、接种物和接种量等的影响。发现培养基丰富程度影响KT2440对盐份的盐份渗透胁迫适应性,在完全培养基中KT2440对盐份的耐受性要比在基础盐培养基中高。加大接种量可以提高KT2440对盐份渗透胁迫适应性。加大接种量可以显著缩短KT2440细胞的延滞期,但对代时影响不显著。碳源影响KT2440对盐份的耐受性,在以葡萄糖为碳源的培养基中KT2440对盐份的耐受性要比在以苯甲酸钠为碳源的培养基中高。氮素和钾素含量影响KT2440对盐份的耐受性,提高氮素和钾素浓度有利于提高Pseudomonas putida KT2440对盐份的耐受性。接种物培养基盐浓度影响KT2440对盐份渗透胁迫适应性,于0.8mol/L NaCl中培养的接种物对盐份渗透胁迫适应性要比于0mol/L NaCl中培养的要高。接种物培养液上清影响KT2440对盐份渗透胁迫适应性,去除接种物培养液上清使KT2440对盐份渗透胁迫适应性下降。接种物培养

【关键词】:
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q935
【目录】:

  • 摘要5-8
  • ABSTRACT8-12
  • 符号与缩略语说明12-14
  • 前言14-15
  • 第一章 文献综述15-64
  • 第一节 微生物耐盐调控机制及耐盐基因的研究15-44
  • 第二节 植物渗透调控机制及耐盐基因工程研究进展44-64
  • 第二章 Pseudomonas putida KT2440的耐盐性研究64-74
  • 1.材料与方法64-67
  • 2.结果分析67-73
  • 3.小结73-74
  • 第三章 外源相容性溶质对KT2440的渗透保护作用及其机理74-90
  • 1.材料与方法75-77
  • 2.结果分析77-89
  • 3.小结89-90
  • 第四章 四氢嘧啶对KT2440渗透保护的分子机理研究90-127
  • 第一节 四氢嘧啶降解基因的敲除91-108
  • 第二节 甜菜碱合成基因的敲除108-114
  • 第三节 Halomonas sp.BYS-1四氢嘧啶合成基因ectABC克隆及表达114-122
  • 第四节 四氢嘧啶及其合成基因对A55db盐份适应性的影响122-126
  • 小结126-127
  • 第五章 otsBA在KT2440中的表达及对其盐份适应性的影响127-136
  • 1.材料与方法128-131
  • 2.结果分析131-135
  • 3.小结135-136
  • 第六章 betAB组成性表达提高KT2440对盐份渗透冲击适应性的研究136-151
  • 1.材料与方法137-143
  • 2.结果分析143-150
  • 3.小结150-151
  • 本文主要结论和创新点151-153
  • 参考文献153-167
  • 致谢167-168
  • 博士期间发表论文情况168
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    本文编号:171890

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