ARMS-PCR-金磁微粒层析方法的建立及其在基因多态性检测中的应用

发布时间：2024-07-05 21:18

　　中国心脑血管患病及死亡率逐年攀升,占居民疾病死亡构成的40%,住院总费用每年超过千亿。建立以患者为中心,以高血压、血脂异常等危险因素管理为突破口的全程综合防治管理模式,是开展重大心脑血管疾病一级预防的关键。单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)已广泛用于疾病诊断、疾病易感性评估、药物遗传学分析等领域。常用SNP检测技术包括测序、实时荧光PCR、DNA芯片杂交、质谱等,可为临床提供准确的基因检测结果,但须依赖昂贵的设备、专业的人员,操作步骤繁琐,检验结果回报时间(Turn-Around Time,TAT)长,因而在资源有限的实验室普及应用受到一定限制。为此,亟需开发快速准确、操作简单、性价比高的分子诊断适宜技术,可应用各级医疗机构、基础临床实验室、疾控中心等多种场合,特别是可利于对大规模人群进行风险基因的快速筛查,以及时干预心脑血管慢性疾病,实现个性化预防和治疗。2007年起,侧向流层析技术(Lateral Flow Assay,LFA)被用于SNP检测领域。通过LFA装置对等位基因特异性产物分析,可快速读取基因型结果。与已有SNP检测方法...

【文章页数】：158 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1-1免疫层析试纸条结构及层析技术原理示意图

西北大学博士学位论文2据双抗体夹心法或竞争法，可有不同的实现模式，如图1-1所示。层析过程中，通过毛细管作用，滴加在样品垫上的待检样品被运送至结合垫，与标记材料结合，通过液体层析被共同带往硝酸纤维素膜，与预先包被在检测线与质控线处的受体发生特异性结合反应，10min左右反应时间，....

图1-2引物延伸反应结合LFA试纸条进行SNP基因分型的示意图[23]

生成等位基因特异性产物。Loannis等[23,24]的研究中，所设计的特异性引物5’端带有一段Poly(dA)，并在引物延伸反应的过程中，掺入带有生物素（Bio）标记的dUTP，使得PEXT后得到的等位基因特异性产物能够被LFA试纸条检测。使用LFA试纸条进行分析时，等位基因特....

图1-3寡核苷酸连接反应结合LFA试纸条进行SNP基因分型的示意图[25]

西北大学博士学位论文4金纳米颗粒表面poly(dT)杂交，然后另一端的生物素被固定在检测线（T线）处的链亲和素所捕获，产生红色条带。多余的金纳米颗粒被固定在质控线的poly(dA)所捕获，作为LFA试纸条的质控。通过T线处红色条带的有无，判读基因分型结果。图1-3寡核苷酸连接反应....

图1-4等位基因特异性杂交结合LFA试纸条进行SNP基因分型的示意图[28]

西北大学博士学位论文4金纳米颗粒表面poly(dT)杂交，然后另一端的生物素被固定在检测线（T线）处的链亲和素所捕获，产生红色条带。多余的金纳米颗粒被固定在质控线的poly(dA)所捕获，作为LFA试纸条的质控。通过T线处红色条带的有无，判读基因分型结果。图1-3寡核苷酸连接反应....

本文编号：4001546