多抗PVY, TMV 和CMV 转基因烟草的培育.pdf

  本文关键词：多抗PVY、TMV和CMV转基因烟草的培育，由笔耕文化传播整理发布。

中国农业科学 2008,41 4 :1040-1047 Scientia Agricultura Sinica 多抗PVY、TMV和CMV转基因烟草的培育 1,2 1,2 2 朱常香 ，宋云枝 ，，温孚江 1 2 （山东农业大学生命科学学院，山东泰安 271018 ； 作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018 ） 摘要：【目的】利用RNA介导抗性培育抗多种植物病毒的转基因烟草。【方法】分别以马铃薯Y病毒（PVY）、 烟草花叶病毒（TMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）全长衣壳蛋白（CP）基因为模板，通过设计 PCR 引物和亚克隆获得 PVY CP 3′端长度 100 bp、TMV CP 3′端长度 100 bp 和 CMV CP 3′端长度 200 bp 的 cDNA 片段并拼接成嵌合基 因，并以此为模板构建反向重复结构嵌合基因的植物表达载体pRHPTC。将pRHPTC通过冻融法导入农杆菌LBA4404， 采用叶盘法转化烟草 NC89，然后测定转基因烟草对 3 种病毒的抗性。【结果】经卡那霉素筛选和 PCR 检测，共获 得276株转基因烟草。Southern和Northern blot分析表明，外源基因以不同拷贝数整合于烟草基因组中；不同 转基因植株中病毒RNA的积累量存在显著差异。抗病性检测显示：23%左右的转基因植株表现出对3 种病毒侵染的 抗性。对转基因植株扩繁后代和T1 代的抗性分析表明：多病毒抗性表现稳定。【结论】利用RNA介导的抗病毒基因 工程可获得同时抗多种病毒的转基因烟草，其抗病性在T 代扩繁植株和T 代植株中得到稳定遗传。 0 1 关

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