干露胁迫对菲律宾蛤仔免疫指标和基因表达的影响

发布时间：2017-04-05 18:02

  本文关键词：干露胁迫对菲律宾蛤仔免疫指标和基因表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：菲律宾蛤仔是一种重要的养殖滩涂贝类,在南北方养殖海域均有分布。在菲律宾蛤仔养殖和运输过程中,经常会处于干露和温度变化状态。本实验以正常饲养条件下的菲律宾蛤仔为对照,研究了不同温度下(5℃、15℃、25℃)的干露对菲律宾蛤仔免疫指标的影响,同时还对干露胁迫下蛤仔差异表达基因进行了筛选。研究结果有助于揭示菲律宾蛤仔响应温度和干露胁迫的免疫学机理,得到的大量转录组数据平台有助于探究软体动物耐干露胁迫的分子机理,同时为菲律宾蛤仔长途运输的方式方法选择提供一定的理论依据。主要研究结果如下:1.不同温度(5℃、15℃、25℃)下的干露对菲律宾蛤仔存活率的影响不同温度下的干露对菲律宾蛤仔的存活率存在不同程度的影响。随着干露过程中温度的升高,蛤仔成贝的死亡率增加;随着干露时间的延长,死亡率也增加。蛤仔在干露胁迫下,双壳紧闭,以保存水分提高耐干露能力,表明蛤仔具有很强的耐干露能力。各温度组蛤仔干露48h内的死亡率10%,表明在菲律宾蛤仔的运输过程中,48h内的运输基本可以常温进行,如能控制住15℃以下则更好。更长时间的干露运输则应选择低温条件下进行。2.不同温度(5℃、15℃、25℃)下的干露对菲律宾蛤仔免疫指标的影响干露胁迫下,蛤仔MDA和NO显著升高,说明干露胁迫在蛤仔体内引发脂质过氧化反应产生过多的丙二醛,从而促使蛤仔机体产生了大量的NO对自身进行保护。干露过程中蛤仔酸性和碱性磷酸酶以及SOD、CAT两种抗氧化酶活力未出现显著规律性变化,但恢复海水培养期有不同程度的升高,说明干露及温度胁迫可能会使蛤仔机体代谢产生代偿性升高,推测可能存在一定程度的补偿生长和提高免疫力的现象,这也将是蛤仔健康养殖研究领域的一个重要方向。这一过程中内脏团发挥的作用大于鳃组织,且低温状况下的干露对蛤仔的伤害较小,蛤仔对自身的保护作用更加明显。3.干露胁迫下菲律宾蛤仔差异基因的筛选和表达分析利用第二代高通量测序技术构建了菲律宾蛤仔c DNA文库,完成了转录本的拼接和对转录本进一步的功能注释。在此基础上,运用RNA-Seq技术进行了干露胁迫下菲律宾蛤仔内脏团和鳃差异基因的筛选和表达分析。混合拼接共获得转录本241381条(长度大于200bp),平均长度为769bp,其中N50为1277bp。Unigene共有156644条(长度大于200bp),平均序列长度为649bp,N50为1046bp。30.76%的unigene在数据库中得到注释,108457条未能得到成功注释,功能未知。干露胁迫导致蛤仔内脏团1742条基因差异表达,其中上调基因有1171条,下调基因571条;导致鳃中1765条基因差异表达,包含上调基因832条和下调基因933条。内脏团中上调基因较多,而鳃中下调基因较多,说明干露部分激活了内脏团中的代谢活动,同时抑制了鳃的呼吸活动。
【关键词】：菲律宾蛤仔 干露 温度 免疫指标 差异基因
【学位授予单位】：大连海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4
【目录】：

• 摘要3-4
• abstract4-8
• 第一章 文献综述8-15
• 1.无脊椎动物免疫因子及其对环境胁迫的响应8-11
• 1.1 无脊椎动物免疫因子介绍8-10
• 1.2 温度对水产无脊椎动物免疫因子的影响10-11
• 1.3 干露对海洋无脊椎动物生理生态学的影响11
• 2.环境胁迫下的海洋生物的分子响应机制研究进展11-12
• 2.1 环境胁迫下差异基因的筛选11-12
• 2.2 环境胁迫下基因表达的研究12
• 3.高通量测序技术12-14
• 4.本研究的目的及意义14-15
• 第二章 不同温度下的干露对菲律宾蛤仔免疫指标的影响15-27
• 1. 材料与方法15-16
• 1.1 实验材料15
• 1.2 实验方法15
• 1.3 取样和免疫指标测定15-16
• 2.实验结果16-24
• 2.1 干露时间的选择和确定16-17
• 2.2 不同温度下的干露对菲律宾蛤仔酸性磷酸酶(ACP)活力的影响17-18
• 2.3 不同温度下的干露对菲律宾蛤仔碱性磷酸酶（AKP）活力的影响18-19
• 2.4 不同温度下的干露对菲律宾蛤仔过氧化氢酶(CAT)活力的影响19-21
• 2.5 不同温度下的干露对菲律宾蛤仔超氧化物岐化酶(SOD)活力的影响21-22
• 2.6 不同温度下的干露对菲律宾蛤仔丙二醛(MDA)含量的影响22-23
• 2.7 不同温度下的干露对菲律宾蛤仔一氧化氮(NO)含量的影响23-24
• 3.讨论24-27
• 3.1 蛤仔干露时间与温度24-25
• 3.2 干露对蛤仔免疫指标的影响25-26
• 3.3 蛤仔适应干露胁迫的生理学机制探讨26-27
• 第三章 干露胁迫下蛤仔差异表达基因的分析27-47
• 1.实验材料与方法27-31
• 1.1 实验材料27
• 1.2 试验方法27-31
• 2.实验结果31-45
• 2.1 RNA提取和质量检测31
• 2.2 测序结果质量检测31-33
• 2.3 转录本的拼接33-34
• 2.4 基因功能注释34-39
• 2.5 差异基因筛选和分析39-45
• 3.讨论45-47
• 第四章 结论47-48
• 参考文献48-56
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文56-59
• 致谢59

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