ECEL1基因敲减对人肝癌细胞CDH1、EGR1、FOSL1、MAP3K1基因表达的影响
发布时间：2021-11-14 21:45
目的:研究BEL-7404肝癌细胞ECEL1基因敲减对CDH1、EGR1、FOSL1、MAP3K1基因表达的影响,探讨敲减ECEL1基因后抑制肝癌细胞的增殖、促进其凋亡的机制,为肝癌防治提供新的靶点。方法:实验分为实验组（shECEL1组）和对照组（sh Ctrl组）,应用ECEL1基因的慢病毒载体体外感染人肝癌细胞BEL-7404,通过荧光显微镜检测感染效率;然后提取两组细胞总RNA,通过qPCR检测敲减ECEL1前后BEL-7404细胞ECEL1 mRNA的表达情况;最后通过qPCR分别检测ECEL1基因敲减后人肝癌细胞BEL-7404 CDH1、EGR1、FOSL1、MAP3K1基因表达情况。结果:（1）两组人肝癌细胞BEL-7404慢病毒感染情况:shECEL1组和shCtrl组细胞均可见绿色荧光,计算两组感染效率在80%以上,慢病毒载体感染成功。（2）感染后两组人肝癌细胞BEL-7404 ECEL1 m RNA表达情况:shECEL1组与shCtrl组相比,ECEL1 mRNA的表达受到抑制,表达水平显著降低（P<0.01）敲减效率达到70.5%。成功构建稳定的ECEL...
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图3-1两组慢病毒感染荧光检测结果
硕士学位论文1470.5%；扩增产物熔解曲线显示主峰没有异常加宽和杂峰，说明整个实验过程中未出现非特异性引物二聚体及扩增污染（表3-1，图3-2，图3-3）。这说明稳定的ECEL1基因敲减的人肝癌细胞得以成功构建。表3-1ECEL1基因敲减后mRNA表达水平（xs）及敲减率实验分组2-Ct敲减率tPshECEL10.295±0.0170.705shCtrl1.001±0.052/22.465<0.010.0000.2000.4000.6000.8001.0001.200shCtrlshECEL1实验分组relativemRNAlevel(ECEL1/GAPDH)图3-2ECEL1基因敲减后细胞中ECEL1mRNA表达水平，P<0.01图3-3ECEL1扩增产物熔解曲线
硕士学位论文16图3-5CDH1扩增产物熔解曲线3.4.2ECEL1基因敲减后EGR1表达情况：通过qPCR检测EGR1表达水平，采用2-Ct法分析数据，人肝癌细胞BEL-7404中shECEL1组中EGR1表达丰度是对照组的0.111倍（P<0.01），扩增产物熔解曲线显示主峰没有异常加宽和杂峰，说明整个实验过程中未出现非特异性引物二聚体及扩增污染（表3-3，图3-6，图3-7）。表明敲减ECEL1基因可减弱人肝癌细胞BEL-7404中EGR1基因的表达。表3-3ECEL1基因敲减后EGR1表达水平（xs）及敲减率实验分组2-Ct敲减率tPshECEL10.111±0.0040.889shCtrl1.002±0.072/21.354<0.010.00.20.40.60.81.01.2shCtrl实验分组shECEL1relativemRNAlevel(EGR1/GAPDH)图3-6ECEL1基因敲减后EGR1的表达水平，＜0.01
【参考文献】：
期刊论文
[1]代谢性疾病及治疗药物与肝癌的相关性研究进展[J]. 田婧,蒙秋华,梁秋云,董敏. 中国临床药理学与治疗学. 2019(01)
[2]索拉非尼联合经肝动脉化疗栓塞术和射频消融对肝细胞癌患者生存期的影响[J]. 孙斌,杨晓珍,谢放,庞丽君,陈德喜,王延军. 临床肝胆病杂志. 2019(01)
[3]肝细胞癌的免疫治疗[J]. 任正刚. 临床肝胆病杂志. 2018(07)
[4]2014年中国分地区恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,孙可欣,郑荣寿,张思维,曾红梅,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2018(01)
[5]放射治疗在原发性肝癌治疗中的应用进展[J]. 尹小兰,许青. 现代肿瘤医学. 2016(18)
[6]自然杀伤细胞治疗晚期肝癌的近期临床疗效[J]. 荆娜,张金超,杨岩丽,吴琼,孙雪冬,张晓燕,赵来伟,潘欣,蒋昊,丁国梁,王丹红,陈虎. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2016(04)
[7]PD-1/PD-L1负性协同刺激通路在乙型病毒性肝炎慢性化中的地位及进展[J]. 徐成润,伍伟平. 东南国防医药. 2015(05)
[8]原发性肝癌综合治疗进展[J]. 祝普利,尹超,冯建龙. 临床肝胆病杂志. 2015(06)
[9]Role of radiotherapy in the management of hepatocellular carcinoma:A systematic review[J]. Maria-Aggeliki Kalogeridi,Anna Zygogianni,George Kyrgias,John Kouvaris,Sofia Chatziioannou,Nikolaos Kelekis,Vassilis Kouloulias. World Journal of Hepatology. 2015(01)
[10]原发性肝癌放射治疗现状及前景[J]. 曾昭冲. 中国实用外科杂志. 2014(08)
博士论文
[1]MiR-181a-5p通过靶向调控Egr1抑制Egr1/TGF-β/Smad信号通路延缓肝细胞癌的增殖[D]. 毕建钢.南方医科大学 2019
[2]氡吸入致BALB/c小鼠肺癌的病理观察及Map3k1基因介导的调控机制[D]. 朱顺星.苏州大学 2017
硕士论文
[1]ECEL1基因敲减对肝癌细胞增殖的影响[D]. 王峻峰.南华大学 2019
[2]ECEL1基因敲减对肝癌细胞凋亡的影响[D]. 熊玉婕.南华大学 2019
本文编号：3495401
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图3-1两组慢病毒感染荧光检测结果
硕士学位论文1470.5%；扩增产物熔解曲线显示主峰没有异常加宽和杂峰，说明整个实验过程中未出现非特异性引物二聚体及扩增污染（表3-1，图3-2，图3-3）。这说明稳定的ECEL1基因敲减的人肝癌细胞得以成功构建。表3-1ECEL1基因敲减后mRNA表达水平（xs）及敲减率实验分组2-Ct敲减率tPshECEL10.295±0.0170.705shCtrl1.001±0.052/22.465<0.010.0000.2000.4000.6000.8001.0001.200shCtrlshECEL1实验分组relativemRNAlevel(ECEL1/GAPDH)图3-2ECEL1基因敲减后细胞中ECEL1mRNA表达水平，P<0.01图3-3ECEL1扩增产物熔解曲线
硕士学位论文16图3-5CDH1扩增产物熔解曲线3.4.2ECEL1基因敲减后EGR1表达情况：通过qPCR检测EGR1表达水平，采用2-Ct法分析数据，人肝癌细胞BEL-7404中shECEL1组中EGR1表达丰度是对照组的0.111倍（P<0.01），扩增产物熔解曲线显示主峰没有异常加宽和杂峰，说明整个实验过程中未出现非特异性引物二聚体及扩增污染（表3-3，图3-6，图3-7）。表明敲减ECEL1基因可减弱人肝癌细胞BEL-7404中EGR1基因的表达。表3-3ECEL1基因敲减后EGR1表达水平（xs）及敲减率实验分组2-Ct敲减率tPshECEL10.111±0.0040.889shCtrl1.002±0.072/21.354<0.010.00.20.40.60.81.01.2shCtrl实验分组shECEL1relativemRNAlevel(EGR1/GAPDH)图3-6ECEL1基因敲减后EGR1的表达水平，＜0.01
【参考文献】：
期刊论文
[1]代谢性疾病及治疗药物与肝癌的相关性研究进展[J]. 田婧,蒙秋华,梁秋云,董敏. 中国临床药理学与治疗学. 2019(01)
[2]索拉非尼联合经肝动脉化疗栓塞术和射频消融对肝细胞癌患者生存期的影响[J]. 孙斌,杨晓珍,谢放,庞丽君,陈德喜,王延军. 临床肝胆病杂志. 2019(01)
[3]肝细胞癌的免疫治疗[J]. 任正刚. 临床肝胆病杂志. 2018(07)
[4]2014年中国分地区恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,孙可欣,郑荣寿,张思维,曾红梅,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2018(01)
[5]放射治疗在原发性肝癌治疗中的应用进展[J]. 尹小兰,许青. 现代肿瘤医学. 2016(18)
[6]自然杀伤细胞治疗晚期肝癌的近期临床疗效[J]. 荆娜,张金超,杨岩丽,吴琼,孙雪冬,张晓燕,赵来伟,潘欣,蒋昊,丁国梁,王丹红,陈虎. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2016(04)
[7]PD-1/PD-L1负性协同刺激通路在乙型病毒性肝炎慢性化中的地位及进展[J]. 徐成润,伍伟平. 东南国防医药. 2015(05)
[8]原发性肝癌综合治疗进展[J]. 祝普利,尹超,冯建龙. 临床肝胆病杂志. 2015(06)
[9]Role of radiotherapy in the management of hepatocellular carcinoma:A systematic review[J]. Maria-Aggeliki Kalogeridi,Anna Zygogianni,George Kyrgias,John Kouvaris,Sofia Chatziioannou,Nikolaos Kelekis,Vassilis Kouloulias. World Journal of Hepatology. 2015(01)
[10]原发性肝癌放射治疗现状及前景[J]. 曾昭冲. 中国实用外科杂志. 2014(08)
博士论文
[1]MiR-181a-5p通过靶向调控Egr1抑制Egr1/TGF-β/Smad信号通路延缓肝细胞癌的增殖[D]. 毕建钢.南方医科大学 2019
[2]氡吸入致BALB/c小鼠肺癌的病理观察及Map3k1基因介导的调控机制[D]. 朱顺星.苏州大学 2017
硕士论文
[1]ECEL1基因敲减对肝癌细胞增殖的影响[D]. 王峻峰.南华大学 2019
[2]ECEL1基因敲减对肝癌细胞凋亡的影响[D]. 熊玉婕.南华大学 2019
本文编号：3495401
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3495401.html
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