问号钩端螺旋体LA 2144基因产物PAF-AH和PLA 2 酶活性研究

发布时间：2021-11-29 06:15

　　背景:致病性钩端螺旋体感染引起的钩端螺旋体病是全球流行的人兽共患传染病,我国也是该病流行疫区。肺出血和黄疸是钩端螺旋体病特征性病变,其中肺弥漫性出血（PDH）病人死亡率高达50%以上。尽管近年我们发现致病性问号钩端螺旋体（Leptospira interrogans）通过竞争性抑制假血友病因子（vWF）介导的血小板凝聚而导致出血,但钩端螺旋体病肺出血机制仍然了解甚少。问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株LA 2144基因产物注释为SGNH水解酶,SGNH水解酶超家族包括血小板活化因子乙酰水解酶（PAF acetylhydrolase,PAF-AH）和磷脂酶 A2（phosphatidase A2,PLA2）,但 LA 2144 基因产物 PAF-AH 和 PLA2酶活性及其在钩端螺旋体病肺出血和炎症反应中的作用及其机制了解甚少或未见文献报道。方法:采用生物信息学软件预测致病性问号钩端螺旋体赖株LA 2144基因跨膜区、信号肽和结构域。构建无信号肽LA 2144基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rLep2144,采用SDS-PAGE检测表达效果和提纯情况。采用表面活性剂... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．２哺乳动物ＰＡＦ－ＡＨ［２８］??

ＰＡＦ能被血小板活化因子乙酰水解酶（ＰＡＦａｃｅｔｙｌｈｙｄｒｏｌａｓｅ，?ＰＡＦ－ＡＨ）水解生成无??活性的溶血?ＰＡＦ?（ｌｙｓｏ－ＰＡＦ）?［２８＿３Ｇ］。??ＰＡＦ－ＡＨ在哺乳动物体内主要分为细胞型Ｉ、ＩＩ型和血浆型（如图１）：细胞Ｉ??型是多聚酶，偏好水解底物ｓｎ－２位上的乙酰基，分为ｌａ型和ｌｂ型。ｌａ型是异源二??聚体，由２９和３０?ｋＤａ大小的两个催化亚基ｃｔｌ和ａ２组成，ｌｂ型是异源三聚体，??由２９和３０?ｋＤａ大小的两个具有催化功能的ａｌ和ａ２亚基和４５?ｋＤａ大小的无催化??功能Ｐ亚基组成，其结构类似于三聚体Ｇ蛋白；细胞ＩＩ型和血浆型ＰＡＦ－ＡＨ是结??构相似的单体酶，可水解氧化修饰过的磷脂［２８］；二者具有４３％的氨基酸序列相似??性，大小分别为４３?ｋＤａ和４０?ｋＤａ，但细胞ＩＩ型ＰＡＦ－ＡＨ缺少血浆型ＰＡＦ－ＡＨ结构??中用于外分泌的Ｎ端５０个氨基酸残基及与脂蛋白结合的区域。在血液中７０％血浆??型ＰＡＦ－ＡＨ与低密度脂蛋白（ｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙ?ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，?ＬＤＬ）结合，３０％血浆型??ＰＡＦ－ＡＨ?与高密度脂蛋白（ｈｉｇｈ－ｄｅｎｓｉｔｙ?ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，?ＨＤＬ）结合［３１＿３３］。??图１．２哺乳动物ＰＡＦ－ＡＨ［２８］??Ｆｉｇ?１．２?Ｍａｍｍａｌ?ＰＡＦ－ＡＨ??在问号钩端螺旋体赖株基因组（ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＣ＿０〇４３４２．２）中ＬＡ＿２１４４基因产??物被注释为ＳＧＮＨ水解酶［３４］。ＳＧＮＨ水解酶超家族包括ＰＡＦ－ＡＨ和ＰＬＡ２。通过序??列比对分析发现

２１４４基因产物结构域??ＬＡＪ２１４４?基因产物拥有?Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ?氧阴离子穴（ｏｘｙａｎｉｏｎ?ｈｏｌｅ）和?Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ??催化三联体（ｃａｔａｌｙｔｉｃ?ｔｒａｉｄ）结构，属于ＳＧＮＨ水解酶超家族（图２．２）。我们猜测??其可能的作用机制为：底物进入催化三联体口袋后形成四面体复合物，氧阴离子??洞的氧阴离子可稳定四面体复合物，且其负电荷结构有利于催化三联体发挥酶切??作用丨５７】。??从图２．２所示，Ｌ?於ｍｙ?ｓｔｒａｉｎ?Ｌａｉ?ＬＡ＿２１４４基因产物：方框内为催化三联??体，下划线加粗为氧阴离子穴。??ＭＡＫＦＬＦＳＩＳＬＬ．ＦＬＦＴＹＣＳＳＬ１ＫＫＳＹＴＤＤＹＳＳＰＮＦＥＣＷＳＧＳＧＦＲＤＳＥＴＦＧＬＹＫＳＡＷＡＥＬＲＮＦＹＫＩＥＮＱＫＩＫ??ＳＡＮＩＶＦＶＧＤ｜ＵＱＩ，ＦＰＫＩ｛ＬＭＱＥＦＰＧＡＶＮＲＧＩＧＧＤＬＴＥＴＬＬＥＲＩＥＥＤＶＬＳＬＮＰＫＶＩＶＬ［ｉＩＧＧＮＤＬＩＱＧＫＣ??ＬＨＩＴＲＴＮＬＮＲＩＬＥＫ?ｔＬＫＦＮＰＮＩＫＩＶＩＬＧＩＰＰＶＲＮＱＴＶＮＲＶＳＰＶＬＮＬＴＷＩＳＩＩＲＰＹＫＮＶＥＦＬＤＧＷＱＦＬＲＥＫ??ＤＲＰＶＬＤＳＥＦＷＰＧＱ§ＫＩ０ＶＮＥＫＡＹＲＡＷＩＨＫＬＫＰＩＬＬＰＹＬ??ＬＡ＿２１４４?ｇｅｎｅ?ｐｒｏｄｕｃｔ?（２４８?ａａ）??１?２５?５０?７５?１００?１２５?１５０?１７５?２００?２２５?２４８??｜ｍＩ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?？?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｊ?ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?？?ｉ?Ｉ?ｌ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｉ?？?ｉ?ｉ??８０

【参考文献】：
期刊论文
[1]细菌SGNH家族水解酶的研究进展[J]. 霍颖异,戎振,许学伟.  生物资源. 2017(06)
[2]钩端螺旋体LA2144基因产物血小板活化因子乙酰水解酶活性的研究[J]. 唐梅荣,赵金方,董世雷,胡玮琳,林旭瑷,严杰.  中华微生物学和免疫学杂志. 2015 (08)
[3]血小板活化因子及其乙酰水解酶与支气管哮喘[J]. 薛金梅,石玉珍.  中国现代医生. 2009(23)
[4]内皮素和血小板活化因子在急性胰腺炎发病机制中的意义[J]. 黄博,张永宏,周力.  贵州医药. 2009(02)
[5]血小板活化因子水解酶研究进展[J]. 周春,经承学.  中国医学文摘(内科学). 2006(04)
[6]全身炎症反应综合征患者血清细胞因子动态变化的研究[J]. 梅雪,李春盛,王烁.  中国危重病急救医学. 2006(02)



本文编号：3526001