普鲁兰酶基因在毕赤酵母中的表达研究

发布时间：2021-11-29 09:09

　　现代工业体系中,淀粉的加工过程是通过添加多种酶制剂逐步水解来完成的,普鲁兰酶作为一种重要的淀粉脱支酶在工业上主要用于淀粉加工中的糖化反应,在糖化反应时加入普鲁兰酶,分支点处的α-1,6连接可被普鲁兰酶水解,可以最大限度减少糊精生成量,提高麦芽糖的含量,使淀粉大分子降解效率大幅度提升。本实验含有从嗜热菌Thermogota thermarum的普鲁兰酶基因的重组质粒出发,设计引物扩增出含有双酶切位点的线性基因;选用pPIC3.5k质粒作为载体进行毕赤酵母胞内表达;双酶切质粒和基因后酶连获得正确转化子;在大肠杆菌中进行大量克隆并提取质粒,将质粒线性化后浓缩纯化,并以同源重组整合的方式电转入毕赤酵母GS115基因组中,然后筛选出甲醇利用快速型和高拷贝型的阳性转化子;对该重组菌进行了诱导,分析了其表达量。 

【文章来源】：河南农业. 2020,(21)

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

空载质粒与pET21a-TT重组质粒电泳检测M.marker 1.pET21a 2.pET21a-TT

如图2-2所示，基因的条带迁移距离相对于Marker条带的位置符合其序列长度，目的条带切胶回收后测序结果正确。证明已经成功的扩增出含有双酶切位点的线性普鲁兰酶基因。如图2-3所示，基因和载体双酶切之后进行琼脂糖凝胶电泳检测，目的pulA基因大小是2556 bp，载体大小是9004 bp，对照marker条带的结果，基因条带位置与预期结果基本相同，证明基因和载体在大小上基本正确，可以进行下一步酶连。图2-4菌落PCR电泳图

菌落PCR电泳图

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[2]大豆悬浮细胞培养及作为外源基因转化受体的研究[D]. 方星.苏州大学 2014
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本文编号：3526235