Survivin对Eca-109细胞自噬溶酶体形成相关蛋白调控的初步研究

发布时间：2021-12-08 22:03

　　目的:研究Survivin对Eca-109细胞自噬溶酶体形成相关蛋白的调控。方法:选用雷帕霉素(RAPA)构建自噬诱导模型,使用Survivin(SVV)过表达质粒、SVVshRNA质粒、Survivin的抑制剂YM155等对自噬模型进行干预。本实验中选用激光共聚显微镜,观察自噬体及自噬进展变化;选用Western blot法检测自噬溶酶体形成过程相关基因蛋白水平上的表达变化;选用免疫荧光染色法检测溶酶体pH值及细胞中Cathepsin-D的分布特点。结果:1)通过RAPA诱导转染了mRFP-eGFP-LC3质粒的Eca-109细胞后,激光共聚焦显微镜可观察该细胞中绿色荧光明显增多(P<0.05),即自噬体增多;Western blot检测结果显示,LC-I、LC-II的蛋白表达量呈现升高的趋势,LC-I/LC-II的比值减少,p62表达量下降,自噬增强;2)在Eca-109细胞自噬模型中,SVV过表达后,Rab7、LC3蛋白表达量增加(P<0.05),ATG5蛋白表达量下降、ATG16L1蛋白表达量变化不明显。当SVVshRNA及YM155干预后,Rab7蛋白表达量增加,...

【文章来源】： 新疆医科大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：58 页

【文章目录】：
中英文缩略词对照表
摘要
Abstract
前言
研究内容与方法
    1 实验材料及设备
        1.1 实验材料
        1.2 试剂设备
    2 实验方法
        2.1 细胞实验
        2.2 感受态细菌转化
        2.3 质粒转染、抽提
        2.4 抑制剂浓度的选择
        2.5 自噬模型建立
        2.6 脂质体电转染
        2.7 图片采集(激光共聚焦)
        2.8 细胞凋亡
        2.9 免疫印迹(Western blot)
    3 质量控制
    4 统计方法
结果
讨论
小结
致谢
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的学位论文
导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
[1]增生性瘢痕形成过程中自噬相关蛋白LC3、P62及Beclin-1的表达及临床意义 [J]. 陈晓霞,瞿思维,韩笑,陈孜孜,陈佳,李萍,尹朝奇,曾赛男,王爱军,贺斌,苏红辉,周建大.  中国医师杂志. 2019(04)
[2]自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、Atg5在前列腺腺癌组织中的表达及意义 [J]. 王钱虎.  浙江医学. 2018(16)
[3]自噬相关蛋白ATG16L1在肠上皮细胞炎症因子表达中的作用 [J]. 王嘉正,沈玉洁,张琮,周明霞,陈颖伟.  胃肠病学. 2018(08)
[4]自噬在肿瘤发生发展中的调控作用以及通过靶向自噬抑制肿瘤的研究进展 [J]. 徐然,邵弘,朱静.  生命科学. 2018(07)
[5]蛋白乙酰化和自噬在特发性肺纤维化中的研究进展 [J]. 郑珍珍,林子英,宋泽庆,刘刚.  海南医学. 2018(10)
[6]细胞自噬的分子调控机制研究进展 [J]. 李媛,高维娟.  承德医学院学报. 2018(02)
[7]细胞自噬及其与肿瘤发生关系的研究进展 [J]. 杜云广,王书华.  河北北方学院学报(自然科学版). 2018(02)
[8]电针对鱼藤酮诱导的帕金森病模型大鼠黑质内自噬相关蛋白表达的影响 [J]. 王述菊,余沛豪,马骏,王中明,王琪,王彬.  辽宁中医杂志. 2017(09)
[9]mTOR信号通路诱导的自噬在心肌细胞缺氧损伤中的作用研究 [J]. 张铮,杨超,靳志涛,蒋伟,赵力,杨军珂,丁力平,王承竹,柳彦君,孙志敏,胡桃红.  现代生物医学进展. 2017(09)
[10]mTOR抑制剂对大鼠肝癌生长抑制作用的研究 [J]. 蔡靓羽,张建楠,尹卫娟,徐敏逸,赵劲风.  中国现代医学杂志. 2017(02)

博士论文
[1]黏菌素诱导细胞凋亡和自噬分子机制及靶向调控研究[D]. 代重山.中国农业大学. 2017
[2]组织蛋白酶D功能抑制在α-synuclein降解障碍中的作用及机制研究[D]. 李凌云.苏州大学. 2016
[3]mTORC2/mTORC1抑制剂诱导骨髓增生异常综合征/白血病细胞发生自噬性死亡及作用机制研究[D]. 岳青芳.华中科技大学. 2015
[4]磷酸化调控FUNDC1介导的线粒体自噬研究[D]. 陈果.南开大学. 2014

硕士论文
[1]食品源性铅暴露对细胞自噬溶酶体通路的损伤及可能机理研究[D]. 韩苗苗.合肥工业大学. 2018
[2]Survivin对肿瘤细胞自噬溶酶体形成过程相关基因表达调控的研究[D]. 李晓苗.新疆医科大学. 2017
[3]上皮性卵巢癌组织中Atg5、Beclin1、P53的表达及相关性研究[D]. 曹蒙.郑州大学. 2016



本文编号：3529323