玉米ZmHSP70-4.1、ZmHSP70-12基因响应非生物逆境的功能分析

发布时间：2021-12-10 16:11

　　热激蛋白是生物遭到胁迫时产生的一类蛋白,除此之外,在生长发育中也具有非常重要的功能。热激蛋白70（HSP70）是热激蛋白家族中高度保守的一类,参与了高温、干旱、盐等多种非生物逆境胁迫。玉米作为重要的农作物,经鉴定发现HSP70家族包括多个成员,绝大多数成员的功能还不清楚,本研究对ZmHSP70-4.1、ZmHSP70-12基因的的蛋白序列、亚细胞定位及探索及功能进行了分析,最后通过互作蛋白的筛选及验证为其作用机制进行初步探索。通过生物信息学分析ZmHSP70-4.1、ZmHSP70-12的亚细胞定位及氨基酸序列基序分析,发现ZmHSP70-4.1、ZmHSP70-12蛋白与HSP70蛋白保守序列及结构非常相似,生物信息学预测显示二者分别定位在细胞质和内质网;构建亚细胞定位载体并瞬时转化烟草,并在荧光共聚焦显微镜下观察到ZmHSP70-4.1定位于细胞质/核,ZmHSP70-12定位于内质网,与生物信息学预测结果一致。构建ZmHSP70-4.1超表达载体,获得纯合拟南芥超表达株系,通过皿中甘露醇及盐处理下的移苗试验发现超表达植株根长长于野生型,并且高盐胁迫下,超表达植株存活率高于野生型;... 

【文章来源】：河北农业大学河北省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HSP70结构模型

P 的分子伴侣 HSP40(DnaJ)和核苷酸交换因子 NEF。HSP并与其结合从而防止其聚集，底物的结合和释放通过 AT在这种情况下，底物与 HSP70 之间的相互作用由 HSP40HSP40s 还可以与未折叠的肽链直接相互作用并将蛋伴侣蛋白折叠的早期阶段中，HSP40 在底物识别和递送用。然后，J-结构刺激 HSP70 的 ATP 酶活性，从而使 H作用(图 2)。ATP 酶活性的刺激是通过与 J-结构域内包含(HPD)的保守三肽的特异性相互作用实现的。HSP40 在细 ER，以及细胞溶质，这些部位的基因表达同时受 ER 应

图 3 ZmHSP70s 蛋白结构及氨基酸序列分析Fig.3 ZmHSP70s proteins structure胞定位克隆及亚细胞定位载体构建证亚细胞定位预测的准确性，根据 ZmHSP70-4.1、ZmHSP70-异性引物，并在上下游加入了限制性酶切位点，由于目的基因的上游，所以在设计 ZmHSP70-4.1、ZmHSP70-12 下游引物时必 4a)。以 cDNA 为模板扩增 ZmHSP70-4.1、ZmHSP70-12，利用PCR 扩增产物(图 4b)。将 ZmHSP70-4.1、ZmHSP70-12 与克隆载，将菌落 PCR 和双酶切验证正确的阳性克隆送测序。序正确的基因片段和 pSuper1300:GFP 载体连接，经双酶切验-4.1-GFP，ZmHSP70-12-GFP 亚细胞定位载体构建成功(图 4c)。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3532960