农杆菌介导的EβF合成酶基因转化拟南芥及Cre/loxp系统的应用

发布时间：2021-12-15 18:44

　　转基因技术研究倍受国内外的高度关注,但筛选标记基因的安全性一直是人们讨论的话题,去除筛选标记基因是解决转基因安全隐患的重要措施。反-β-法尼烯（EβF）是一种倍半萜烯类化合物,是蚜虫受到攻击时产生的一种报警素。从薄荷中分离的EβF合成酶基因能够在植物中产生EβF,该物质能够驱使蚜虫逃离,从而减轻或避免植物受到蚜虫的危害,具有环境友好、无污染、绿色环保、保护天敌的作用。本文通过载体构建、基因转化和标记基因删除等主要环节,将目的基因-----EβF合成酶基因成功转入拟南芥中,并对选择标记基因的删除进行了研究。试验得出如下结论:（1）利用含目的基因EβF的基础载体p ART7-EβF产生出过渡载体p NMCS-EβF,再由过渡载体p NMCS-EβF与含Cre/loxp自删除结构的空载体PNCX构建了含目的基因和筛选标记基因新霉素磷酸转移酶基因（nptⅡ）的自删除载体PNCX-EβF;（2）通过农杆菌介导将自删除载体PNCX-EβF转化拟南芥,用抗生素G418作为选择剂。G418筛选转化拟南芥的适宜浓度为:培养基培育幼苗的最佳浓度为20 mg/L,喷洒土培幼苗的最佳浓度为50 mg/L;（3... 

【文章来源】：河南农业大学河南省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PNCX-EβF菌液PCR检测Fig.3-1DetectionofPNCX-EβFbacterialsolutionbyPCR

pNMCS-E F6400bpAscIPacIAmpE F图 3-2 过渡质粒 pNMCS-EβF 菌液 PCR 检测Fig.3-2 Detection of transition plasmid pNMCS-EβF bacterial solution by PCR注：图中 1-7 为挑取的克隆菌液，其中 1-4 和 6-7 为阳性菌液，5 为阴性菌液； +为 pNCX-EβF 质粒作阳性对照；-为水作阴性对照;M 是 DL2000。Note: 1-7 for the picked clones bacteria liquid， 1-4 and 6-7 for positive bacteria liquid， 5 for the negative bacterialiquid; + asthe positive CK of PNCX-EβF plasmid; - as the negative CK of water; M as the mark of DL2000载体 PNCX-EβF 构建过程见图 3-3。pART7-E F6696bpNotINotAmpE FCAMV 35S

水培容器Fig.3-4Watercontainer

【参考文献】：
期刊论文
[1]Cre/Loxp系统在转基因拟南芥杂交后代中的删除效率分析[J]. 李嘉蕙,葛佳,汪丽君,文梦玲,陆万香,罗克明.  西南师范大学学报(自然科学版). 2015(07)
[2]Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能评价[J]. 王志蕊,刘西梅,周荆荣,郑新民,魏庆信,董发明,毕延震.  中国生物化学与分子生物学报. 2014(02)
[3]提高转基因植物标记基因安全性策略的研究进展[J]. 李文凤,季静,王罡,王海勇,牛宝龙.  中国农业科学. 2010(09)
[4]小麦转基因技术研究及其应用[J]. 喻修道,徐兆师,陈明,李连城,马有志.  中国农业科学. 2010(08)
[5]一种利用Cre/loxP系统进行标记基因删除与靶基因置换的细胞模型研究（英文）[J]. 崔文涛,任立明,侯健,张颖,陈永福,安晓荣.  生物化学与生物物理进展. 2008(06)
[6]转基因植物高效删除标记基因的实用型双元转化载体[J]. 李霞,翁海波,韩绍印,席宇,雍克兰.  生物工程学报. 2006(04)
[7]基因工程防治蚜虫研究进展[J]. 郑光宇.  喀什师范学院学报. 2006(03)
[8]NPTⅡ基因和GUS基因在小麦遗传转化中的应用[J]. 张文蔚,成卓敏.  植物保护. 2004(01)

博士论文
[1]EβF合成酶基因的克隆及功能分析[D]. 喻修道.中国农业科学院 2010
[2]一种用于转基因植物安全性控制的高效基因删除系统“Gene-Deletor”的构建[D]. 罗克明.西南农业大学 2004

硕士论文
[1]转基因抗蚜小麦抗麦长管蚜效果的评价技术研究[D]. 邓青.中国农业科学院 2012
[2]转Eβf合成酶基因水稻对水稻害虫趋避性的研究[D]. 张曦廷.华中农业大学 2011



本文编号：3536950