调控珠子参皂苷生物合成PjFPS/β-AS关键酶基因的克隆与功能研究

发布时间：2021-12-24 17:22

　　珠子参为五加科人参属植物,在我国有悠久的药用历史,以其根茎入药。珠子参药材主要分布于云贵、四川、陕西等地,具有抗炎、祛瘀止痛、抗肿瘤、止血、抗氧化等功效。珠子参皂苷是珠子参的主要活性成分,由达玛烷型和齐墩果烷型三萜皂苷组成。目前,珠子参药材多为野生品,其生长周期长,一般生长6-7年方能入药,供需矛盾突出。有必要利用现代分子生物学及基因工程技术研究珠子参皂苷的生物合成途径,进而开展珠子参皂苷的合成生物学研究。本研究首先利用异硫氰酸胍法提取了珠子参愈伤组织的总RNA,并将其反转录形成了cDNA,并以此cDNA为模板,通过同源克隆的方法成功获得PjFPS基因的全长序列（KP684141）,对该序列进行生物信息学分析,构建了pGEM-T-Pj FPS克隆载体和植物过表达载体pCMBIA1300s-Pj FPS。通过根癌农杆菌转化法将Pj FPS转化到野生型珠子参细胞中,获得阳性转基因细胞;依据同样的方法又将Pj FPS转化到过表达β-AS基因的珠子参细胞中,并成功获得阳性转基因细胞。通过实时荧光定量PCR、比色法及皂化法等技术测定了转FPS基因阳性细胞系中Pj FPS基因的相对表达量、FPS酶... 

【文章来源】：昆明理工大学云南省

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

珠子参中的齐墩果烷型三萜及其皂苷类化合物结构

参皂苷 IVa 甲酯结构如图 1.2 所示。图 1.2 珠子参中的齐墩果烷型三萜皂苷（A: 竹节参皂苷 IVa，B：竹节参皂苷 Iva 甲酯）Fig. 1.2 The structure of oleanane-type saponins in Panax japonicus(A: ChikusetsusaponinIVa, B: Chikusetsusaponin IVa methyl ester)达玛烷型三萜皂苷

珠子参中的齐墩果烷型三萜皂苷（A:竹节参皂苷IVa，B：竹节参皂苷Iva甲酯）

【参考文献】：
期刊论文
[1]青蒿HMGR基因家族克隆及对茉莉酸甲酯和损伤的响应[J]. 陈俞裴,申甜,邱飞,陈敏,廖志华,兰小中,杨春贤.  西南大学学报(自然科学版). 2017(12)
[2]杜仲MVA和MEP途径相关基因的亚细胞定位与表达分析[J]. 王淋,杜红岩,乌云塔娜.  植物研究. 2017(01)
[3]紫杉醇纳米制剂的研发进展[J]. 吴娜,张留,张志平,阮金兰.  世界临床药物. 2016(08)
[4]洋常春藤法呢基焦磷酸合酶基因的克隆与序列分析[J]. 阮琴妹,曹雄军,孙化鹏,钟晓红.  湖南农业大学学报(自然科学版). 2016(02)
[5]茉莉酸甲酯处理对何首乌根转录组的影响(英文)[J]. Hong-chang LIU,Wei WU,Kai HOU,Jun-wen CHEN,Zhi ZHAO.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2015(12)
[6]人参15个组织器官中皂苷量与6种人参皂苷生物合成基因表达的相关性研究[J]. 王康宇,张美萍,李闯,蒋世翠,尹锐,孙春玉,王义.  中国中药杂志. 2015(16)
[7]刺五加HMGR基因的表达及其对皂苷合成的影响[J]. 李非非,杨果,吴鹏,邢朝斌.  基因组学与应用生物学. 2015(03)
[8]Regulatory effect of salicylic acid and methyl jasmonate supplementation on ergosterol production in Hericium erinaceus mycelia[J]. Xiaodong Dai,Yaguang Zhan,Jiechi Zhang,Piqi Zhang,Zenghua Han,Qingfang Ma,Xianghui Kong,Jianing Liu,Yinpeng Ma.  Journal of Forestry Research. 2015(01)
[9]茉莉酸甲酯诱导大戟三萜类代谢的研究[J]. 张文娟,曹小迎,蒋继宏.  广西植物. 2015(04)
[10]植物三萜皂苷生物合成中关键后修饰酶研究进展[J]. 黄壮嘉,刘迪秋,葛锋,陈朝银.  西北植物学报. 2014(10)



本文编号：3550890