人MTERF2基因特异性shRNA载体的构建与干扰效果评价

发布时间：2021-12-29 06:09

　　[目的]构建针对人线粒体转录终止因子2（mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2）的shRNA干扰表达载体,检测其对人宫颈癌HeLa细胞MTERF2基因表达的干扰效率。[方法]以人MTERF2基因为靶向,设计并合成的2条互补寡核苷酸链克隆至pSilencer^TM4.1-CMV neo真核表达载体中得到重组干扰质粒。对重组质粒进行PCR和DNA测序鉴定;运用脂质体介导瞬时转染HeLa细胞;采用半定量RT-PCR检测2个干扰质粒对人MTERF2基因mRNA表达的干扰效果,并筛选最有效的shRNA干扰序列;采用Western Blot技术检测2个干扰质粒转染HeLa细胞后MTERF2蛋白的表达情况。[结果]经PCR鉴定和DNA测序鉴定证实,pSi-MTERF2-1和pSi-MTERF2-2重组shRNA干扰表达质粒中已插入目的 DNA片断。瞬时转染MTERF2-shRNA的HeLa细胞48 h后,pSi-MTERF2-1和pSi-MTERF2-2干扰表达质粒均可以显著地降低人MTERF2基因mRNA和... 

【文章来源】：生物技术. 2017,27(05)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
        1.1.4 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 人MTERF2基因靶向shRNA序列的设计与合成
        1.2.2 sh DNA片段与p SilencerTM4.1-CMV neo表达载体的构建
        1.2.3 重组shRNA干扰表达质粒的鉴定
        1.2.4 重组质粒p Si-MTERF2瞬时转染He La细胞
        1.2.5 半定量RT-PCR检测人MTERF2基因mR-NA的表达
        1.2.6 Western Blot检测人MTERF2蛋白的表达
        1.2.7 统计学分析
2 结果与分析
    2.1 MTERF2 sh DNA片段与p SilencerTM4.1-CMV neo质粒连接及其鉴定
    2.2 半定量RT-PCR检测人MTERF2基因mRNA的表达
    2.3 Western Blot检测人MTERF2蛋白的表达
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]人线粒体转录终止因子2在大肠杆菌表达及多克隆抗体的制备与鉴定[J]. 熊伟,孙美涛,梅雯,杨勇琴,自加吉,张晓娟,余敏.  生物技术. 2017(03)
[2]人线粒体转录终止因子2（MTERF2）在Caski宫颈癌细胞的表达和定位[J]. 孙美涛,张成桂,梅雯,杨勇琴,杨泽芳,张晓娟,熊伟.  细胞与分子免疫学杂志. 2017(06)
[3]线粒体转录终止因子蛋白家族的表达以及在MPTP/MPP+诱导下的表达变化[J]. 张林冰,韩艳艳,仇石,许珊,左伋,刘雯.  解剖学报. 2017(01)
[4]线粒体转录终止因子（mTERF）蛋白家族的研究进展[J]. 黄淑颜,丘式浚,陈家逸,陈健璞,李晓云,李玲.  生命科学研究. 2016(05)
[5]人线粒体转录终止因子2基因启动子区的生物信息学分析[J]. 熊伟,张晓娟,孙美涛,张海洋,徐彤.  井冈山大学学报(自然科学版). 2016(01)
[6]线粒体转录终止因子蛋白家族在线粒体基因表达中的调节作用[J]. 熊伟,余敏,左绍远.  中国生物化学与分子生物学报. 2015(03)
[7]线粒体转录终止因子蛋白家族研究进展[J]. 余敏,伍红,谭德勇.  生命科学. 2007(05)
[8]一个人类线粒体转录终止样因子基因的克隆[J]. 陈瑶,何云刚,余敏,钱伟,谭德勇.  云南大学学报(自然科学版). 2003(S1)



本文编号：3555554