脂联素基因修饰对大鼠骨髓来源的内皮祖细胞活性的影响及机制探讨

发布时间：2021-12-29 11:06

　　目的:探究脂联素（APN）基因修饰对内皮祖细胞（EPC）活性的影响及其机制。方法:无菌条件采集3-4周龄SD大鼠胫骨和股骨的骨髓,利用Ficoll-Paque PLUS溶液进行密度梯度离心分离骨髓中的单个核细胞,用EGM-2 Bulletkit培养基定向诱导单个核细胞分化为EPC。通过观察形态、免疫荧光检测细胞表面抗原CD34鉴定EPC。以大鼠EPC细胞的RNA为模板,PCR扩增出携带NheⅠ、XmaⅠ酶切位点的大鼠APN基因,重组到pLKIRG载体中,得到pLKIRG-APN载体,通过NheⅠ、XmaⅠ双酶切检测和Sanger法测序鉴定pLKIRG-APN慢病毒真核表达载体。pLKIRG-APN和pLKIRG分别与慢病毒包装质粒瞬转293T细胞,分别获得对照慢病毒（LV-NC）和过表达APN慢病毒（LV-APN）,利用qPCR Lentivirus Titration Kit检测慢病毒滴度。LV-NC和LV-APN分分别感染EPC细胞48 h,0.1μg/μl嘌呤霉素连续筛选3 d,分别收集LV-APN感染组细胞（EPC-APN）和LV-NC感染组细胞（EPC-NC）。分别通过qPC... 

【文章来源】：广州医科大学学报. 2020,48(05)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

骨髓中分离出的单个核细胞在培养不同时间点的形态（×100)

免疫荧光检测检测内皮细胞的表面标志物CD34

CCK8结果显示，在4 h时EPC-APN与EPC-NC的吸光度没有显著差异，在24、48 h和72 h时EPC-APN的吸光度显著增加，分别比EPC-NC的增加23.8%、10.9%和8.8%（图5），这表明在24、48 h和72 h时EPC-APN的增殖能力比EPC-NC的显著增加。图4 APN过量表达细胞株构鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]球状脂联素对卵巢微血管内皮细胞增殖、迁移及管状结构形成的影响[J]. 陈雷,卢小圣,李雅兰,毛周飞,肖銮娟,禹艳红.  南方医科大学学报. 2017(05)



本文编号：3556001