紫苏二酰甘油酰基转移酶基因（PfDGAT）克隆与功能分析
发布时间：2021-12-31 10:16
紫苏是一种食药同源的油料作物。紫苏种子含油量高达45-55%,其中α-亚麻酸(ALA,18:3Δ9,12,13)含量约55%-65%。ALA是一种健康有益型脂肪酸,在促进人体大脑发育和保护心血管系统等方面具有非常重要的作用。本研究采用分子克隆技术从紫苏发育种子分离三酰甘油（triacylglycerol,TAG）合成关键酶基因PfDGAT1（diacylglycerol acyltransferase 1）和PfDGAT2（diacylglycerol acyltransferase 2）,并分析这两个基因在紫苏不同组织器官和种子发育不同时期的表达谱。构建这两个基因的表达载体,并分别转化酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和普通烟草（Nicotiana tobaccum,Sumsun NN（SNN））,以鉴定这两个基因的生物学功能。本研究将为深入解析紫苏油脂合成调控机制和油脂品质遗传改良提供科学基础。主要研究结果如下:1.基于紫苏转录组数据,鉴定获得PfDGAT1和PfDGAT2基因转录本。定量PCR分析显示,PfDGAT1和PfDGAT2...
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
紫苏植株形态
11紫苏不同组织器官的取材方法如下：根：根系样品取于水培苗。挑选籽粒饱满的‘晋紫苏1号’和‘并紫苏1号’种子，蒸馏水冲洗干净后用0.01%的升汞溶液浸泡8-10min，无菌水冲洗3-4次，将种子放于铺有灭菌滤纸的培养皿中，加入适量蒸馏水使滤纸保持湿润，置于光照培养箱暗培养使紫苏种子萌发。侧根长出后将幼苗移至1/2MS培养液中，用泡沫板固定后继续培养，待幼苗的根长到6-10cm左右时进行取材，放入无RNA酶的EP管中，液氮速冻5min后保存于﹣80℃超低温冰箱备用。茎、叶、花和种子均取自种植于山西农业大学试验站的紫苏植株。待紫苏生长旺盛时，取植株顶端幼嫩的茎、叶，液氮速冻后存于﹣80℃冰箱。盛花期开始挂牌标记花朵，分别取花和不同发育时期（开花后10、20、30、40d）的种子，放入无RNA酶的EP管中，液氮速冻后存于﹣80℃冰箱。图2-2a‘晋紫苏1号’不同组织Fig.2-2aDifferenttissuesof‘Jinzisu1’
12图2-2b‘并紫苏1号’不同组织Fig.2-2bDifferenttissuesof‘Bingzisu1’2.1.2主要试剂EASYspin植物RNA快速提取试剂盒（RN09，购于艾德莱生物公司），5XAll-In-OneMasterMix(withAccuRTGenomicDNARemovalKit)反转录试剂盒（购于ABM公司），EvaGren2XqPCRMasterMix荧光定量PCR试剂盒（购于ABM公司），SanTaqPCRMix（购于生工生物科技股份有限公司），DEPC（购于Biotopped公司），Nuclease-freeH2O、ddH2O等。2.1.3主要仪器高压蒸汽灭菌锅（AutoclaveGI80TW）；普通PCR扩增仪（BIOER）；实时荧光定量PCR仪（Bio-RAD）；各种剂量的移液枪（Eppendrof）；小型离心机（eppendorf、Centrifuge5424R）；漩涡振荡仪；金属浴；琼脂糖凝胶电泳仪（DYY-7C/8C型）；BioDrop蛋白核酸分析仪；紫外凝胶成像系统（Bio-rad）等。
【参考文献】：
期刊论文
[1]2种提取灵芝菌丝体基因组DNA方法的比较[J]. 孙墨可,李晓薇,张曼,田娟,董玉迪. 安徽农学通报. 2018(21)
[2]紫苏PfDGAT2基因生物信息学及表达特性分析[J]. 梁倩,李璐,周雅莉,安茜,王计平. 华北农学报. 2017(05)
[3]高粱苯丙氨酸解氨酶（SbPAL）编码蛋白的生物信息学分析[J]. 张晓瑛,刘宝玲,郝青婷,薛金爱. 山西农业科学. 2016(11)
[4]烟草orf25基因植物表达载体的构建及遗传转化[J]. 陶瑶,饶文平,吴凌敏,谢丽娟,聂亚平,钟思荣,王建革,刘齐元. 江西农业大学学报. 2016(05)
[5]蒺藜苜蓿DGAT1基因的克隆和功能鉴定[J]. 徐荣华,崔涛,王建才,苗永美,钱立生,胡庆森. 西北植物学报. 2016(10)
[6]甘蓝型油菜磷脂二酰甘油酰基转移酶（BnPDAT1）cDNA的克隆和功能鉴定[J]. 谭太龙,冯韬,罗海燕,彭烨,刘睿洋,官春云. 作物学报. 2016(05)
[7]紫苏种子脂肪酸代谢及关键酶基因调控油脂合成规律的研究[J]. 王计平,张玲慧,赵静,王彦尊,李润植. 中国粮油学报. 2016(03)
[8]紫苏的研究进展[J]. 张晓彬,姜文鑫,张琳,王晓飞,崔玲玉. 食品研究与开发. 2015(07)
[9]紫苏DGAT1基因克隆及四尾栅藻表达载体构建[J]. 王莹莹,刘玉,姬妍茹,张正海,周广麒,刘宇峰. 生物技术通报. 2014(05)
[10]陆地棉GhDGAT1基因干涉载体构建与遗传转化[J]. 刘正杰,张园,王玉美,梁伟,华金平. 中国农业大学学报. 2013(05)
硕士论文
[1]过表达蓖麻RcWRI1提高烟叶油脂积累[D]. 吉夏洁.山西农业大学 2018
[2]紫苏种子脂肪酸代谢及合成相关基因PfPDAT的功能分析[D]. 李璐.山西农业大学 2017
[3]紫苏FAD3/FAD7基因种子特异性表达载体的构建及遗传转化研究[D]. 白瑞英.重庆师范大学 2016
[4]紫苏PfPDAT基因克隆、表达特性及单核苷酸多态性分析[D]. 赵静.山西农业大学 2015
[5]花生油脂代谢关键基因在酵母和聚球藻中表达及功能验证[D]. 孙娇娇.哈尔滨工业大学 2014
[6]紫苏种子油脂代谢及限速酶DGAT1基因的表达分析[D]. 张玲慧.山西农业大学 2014
[7]玉米苗期干旱胁迫下可变剪接及其调控因子的研究[D]. 李娇.郑州大学 2013
[8]花生二酰甘油酰基转移酶（DGAT）基因的克隆与分析[D]. 王龙龙.山东师范大学 2010
[9]类胡萝卜素提取及其稳定性的研究[D]. 刘绪广.新疆农业大学 2008
[10]紫苏对黄曲条跳甲控制作用的初步研究[D]. 梁宏卫.广西大学 2007
本文编号：3560079
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
紫苏植株形态
11紫苏不同组织器官的取材方法如下：根：根系样品取于水培苗。挑选籽粒饱满的‘晋紫苏1号’和‘并紫苏1号’种子，蒸馏水冲洗干净后用0.01%的升汞溶液浸泡8-10min，无菌水冲洗3-4次，将种子放于铺有灭菌滤纸的培养皿中，加入适量蒸馏水使滤纸保持湿润，置于光照培养箱暗培养使紫苏种子萌发。侧根长出后将幼苗移至1/2MS培养液中，用泡沫板固定后继续培养，待幼苗的根长到6-10cm左右时进行取材，放入无RNA酶的EP管中，液氮速冻5min后保存于﹣80℃超低温冰箱备用。茎、叶、花和种子均取自种植于山西农业大学试验站的紫苏植株。待紫苏生长旺盛时，取植株顶端幼嫩的茎、叶，液氮速冻后存于﹣80℃冰箱。盛花期开始挂牌标记花朵，分别取花和不同发育时期（开花后10、20、30、40d）的种子，放入无RNA酶的EP管中，液氮速冻后存于﹣80℃冰箱。图2-2a‘晋紫苏1号’不同组织Fig.2-2aDifferenttissuesof‘Jinzisu1’
12图2-2b‘并紫苏1号’不同组织Fig.2-2bDifferenttissuesof‘Bingzisu1’2.1.2主要试剂EASYspin植物RNA快速提取试剂盒（RN09，购于艾德莱生物公司），5XAll-In-OneMasterMix(withAccuRTGenomicDNARemovalKit)反转录试剂盒（购于ABM公司），EvaGren2XqPCRMasterMix荧光定量PCR试剂盒（购于ABM公司），SanTaqPCRMix（购于生工生物科技股份有限公司），DEPC（购于Biotopped公司），Nuclease-freeH2O、ddH2O等。2.1.3主要仪器高压蒸汽灭菌锅（AutoclaveGI80TW）；普通PCR扩增仪（BIOER）；实时荧光定量PCR仪（Bio-RAD）；各种剂量的移液枪（Eppendrof）；小型离心机（eppendorf、Centrifuge5424R）；漩涡振荡仪；金属浴；琼脂糖凝胶电泳仪（DYY-7C/8C型）；BioDrop蛋白核酸分析仪；紫外凝胶成像系统（Bio-rad）等。
【参考文献】：
期刊论文
[1]2种提取灵芝菌丝体基因组DNA方法的比较[J]. 孙墨可,李晓薇,张曼,田娟,董玉迪. 安徽农学通报. 2018(21)
[2]紫苏PfDGAT2基因生物信息学及表达特性分析[J]. 梁倩,李璐,周雅莉,安茜,王计平. 华北农学报. 2017(05)
[3]高粱苯丙氨酸解氨酶（SbPAL）编码蛋白的生物信息学分析[J]. 张晓瑛,刘宝玲,郝青婷,薛金爱. 山西农业科学. 2016(11)
[4]烟草orf25基因植物表达载体的构建及遗传转化[J]. 陶瑶,饶文平,吴凌敏,谢丽娟,聂亚平,钟思荣,王建革,刘齐元. 江西农业大学学报. 2016(05)
[5]蒺藜苜蓿DGAT1基因的克隆和功能鉴定[J]. 徐荣华,崔涛,王建才,苗永美,钱立生,胡庆森. 西北植物学报. 2016(10)
[6]甘蓝型油菜磷脂二酰甘油酰基转移酶（BnPDAT1）cDNA的克隆和功能鉴定[J]. 谭太龙,冯韬,罗海燕,彭烨,刘睿洋,官春云. 作物学报. 2016(05)
[7]紫苏种子脂肪酸代谢及关键酶基因调控油脂合成规律的研究[J]. 王计平,张玲慧,赵静,王彦尊,李润植. 中国粮油学报. 2016(03)
[8]紫苏的研究进展[J]. 张晓彬,姜文鑫,张琳,王晓飞,崔玲玉. 食品研究与开发. 2015(07)
[9]紫苏DGAT1基因克隆及四尾栅藻表达载体构建[J]. 王莹莹,刘玉,姬妍茹,张正海,周广麒,刘宇峰. 生物技术通报. 2014(05)
[10]陆地棉GhDGAT1基因干涉载体构建与遗传转化[J]. 刘正杰,张园,王玉美,梁伟,华金平. 中国农业大学学报. 2013(05)
硕士论文
[1]过表达蓖麻RcWRI1提高烟叶油脂积累[D]. 吉夏洁.山西农业大学 2018
[2]紫苏种子脂肪酸代谢及合成相关基因PfPDAT的功能分析[D]. 李璐.山西农业大学 2017
[3]紫苏FAD3/FAD7基因种子特异性表达载体的构建及遗传转化研究[D]. 白瑞英.重庆师范大学 2016
[4]紫苏PfPDAT基因克隆、表达特性及单核苷酸多态性分析[D]. 赵静.山西农业大学 2015
[5]花生油脂代谢关键基因在酵母和聚球藻中表达及功能验证[D]. 孙娇娇.哈尔滨工业大学 2014
[6]紫苏种子油脂代谢及限速酶DGAT1基因的表达分析[D]. 张玲慧.山西农业大学 2014
[7]玉米苗期干旱胁迫下可变剪接及其调控因子的研究[D]. 李娇.郑州大学 2013
[8]花生二酰甘油酰基转移酶（DGAT）基因的克隆与分析[D]. 王龙龙.山东师范大学 2010
[9]类胡萝卜素提取及其稳定性的研究[D]. 刘绪广.新疆农业大学 2008
[10]紫苏对黄曲条跳甲控制作用的初步研究[D]. 梁宏卫.广西大学 2007
本文编号：3560079
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3560079.html
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