Brachyury基因突变模型小鼠胚胎发育中Wnt、FGF信号通路相关基因表达研究
发布时间：2022-01-01 03:19
Brachyury对调控小鼠胚胎发育,尤其是中胚层的构建发挥着关键作用,缺乏Brachyury蛋白的小鼠胚胎不能正常发育,Brachyury突变小鼠表现出短尾表型。Wnt和FGF信号通路在小鼠胚胎发育中可控制胚胎的轴向发育、EMT等重要的生理过程,Brachyury可能通过与上述两种信号通路的相互作用而导致小鼠短尾表型的产生。为了揭示Brachyury与Wnt及FGF信号通路潜在的相互作用关系。本实验首先使用一种便捷地合成RNA原位杂交探针的方法,对不同发育阶段野生型整体小鼠胚胎进行原位杂交,观察了Brachyury在小鼠胚胎各个发育阶段的位置表达情况。通过提取不同发育时期的Brachyury基因突变模型小鼠胚胎的总RNA,运用荧光定量PCR技术,检测Brachyury基因、Wnt和FGF两种信号通路相关基因的表达情况。实验结果如下:（1）Brachyury的表达在正常小鼠胚胎7.5dpc开始逐渐上调,并在9.5dpc达到峰值,随后表达量逐渐降低,而Brachyury突变小鼠胚胎的Brachyury表达趋势与野生小鼠胚胎的表达情况一致,但表达量明显低于同期野生型胚胎;（2）Ainx2在...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
经典Wnt信号通路Fig.1CanonicalWntSignaling
而 FGF4 只出现在特定发育阶段的特定细胞亚群当中。一系列的，FGF 信号通路参与调控有丝分裂、成骨细胞分化、细胞迁移等重要生理过该家族与肿瘤的发生息息相关[56,57]。FGFR 是具有酪氨酸激酶活性的单程跨膜蛋白，与受体细胞外配体的结合启导级联反应，最终导致目标基因表达的改变。该信号通路级联反应大致为或硫酸肝素蛋白聚糖（HSPG）的干预下，FGF 配体和受体结合形成二聚体上的酪氨酸激酶磷酸化；磷酸化的酪氨酸被含有 SH2 结构域的信号传导介胞质内的信号级联中，酪氨酸磷酸化位点可以与 Src、PLCγ等目标酶结磷酸化，也可作为 Grb2 等衔接蛋白的结合位点。Grb2 通过 SH3 结构域呤核苷酸释放因子 Sos 结合，形成 Grb2-Sos 复合物，该复合物的形成导致 Ras 基因的募集，并进一步激活了 GDP 和 GTP 之间的转化[58,59]（图 2）。
结果与分析.1 获得短尾表型突变小鼠成功繁育获得具有中、短尾表型的子代小鼠。短尾突变小鼠典型的表型特征部结构只有约 0.5-1.5 cm 的尾芽, 因此称之为“短尾（short tail）”，且大部分短鼠尾芽呈轻微卷曲状。与此同时，部分突变小鼠还存在“中尾（middletail）”的表型特征，其尾巴的长度介于短尾与正常尾之间，而且“中尾”表型小鼠的尾梢如同刀切愈合后的“圆头”状，区别于野生型小鼠鼠尾锥尖形的表征 (图 3、图 4)对突变小鼠后代尾长的观察中，我们发现突变小鼠尾长存在一定的差异，即短鼠的尾长普遍在 0.5-1.5 cm 范围之内，但也有个别更短或稍长的个体存在，而表型的小鼠尾长则有更复杂的情况，它们的尾长之差甚至可能达到 2 cm 以上。的结果似乎验证了有关报道提出的短尾表型严重程度与 Brachyury 基因剂量相的结论[2,7]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]FGF/FGFR信号调控成骨细胞分化的研究进展[J]. 李莉莉,魏琦岩,王艳芳,何忠梅,郜玉刚,马吉胜. 中国生物工程杂志. 2017(06)
[2]昆虫小器官RNA荧光原位杂交技术[J]. 陈敏,唐文倩,沈杰,王丹. 应用昆虫学报. 2016(06)
[3]T-box转录因子Brachyury在肿瘤相关研究中的进展[J]. 刘飞,唐旭东. 生命科学. 2015(02)
[4]Brachyury促进肺癌细胞增殖和侵袭、降低化疗敏感性[J]. 许可,刘斌,李晓玲,蒋雨峰,刘永煜. 解剖科学进展. 2014(06)
[5]E8.5-E12.5大鼠胚胎整体原位杂交技术[J]. 张吉霞,蔡玉瑾,谢耀丽,李海荣,乔从进,崔慧林. 神经解剖学杂志. 2013(03)
[6]脊索瘤新型标记物Brachyury相关研究的进展[J]. 刘栓得,初同伟. 重庆医学. 2013(02)
[7]小鼠早期胚胎的全胚原位杂交技术[J]. 肖銮娟,谢琪璇,高桥祐司,秋山泰身,董少男,黄卉卉,罗峰,叶绍恩,张春雪,秦俊文. 暨南大学学报(自然科学与医学版). 2011(06)
[8]地高辛标记的大鼠NGF RNA探针的制备和应用[J]. 沈宓,丁斐. 神经解剖学杂志. 2005(04)
[9]ENU诱导获得一种短尾小鼠及其突变基因的初步定位[J]. 邵义祥,陈兵,张成香,陈春波,薛整风,李厚达. 动物学杂志. 2005(01)
本文编号：3561545
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
经典Wnt信号通路Fig.1CanonicalWntSignaling
而 FGF4 只出现在特定发育阶段的特定细胞亚群当中。一系列的，FGF 信号通路参与调控有丝分裂、成骨细胞分化、细胞迁移等重要生理过该家族与肿瘤的发生息息相关[56,57]。FGFR 是具有酪氨酸激酶活性的单程跨膜蛋白，与受体细胞外配体的结合启导级联反应，最终导致目标基因表达的改变。该信号通路级联反应大致为或硫酸肝素蛋白聚糖（HSPG）的干预下，FGF 配体和受体结合形成二聚体上的酪氨酸激酶磷酸化；磷酸化的酪氨酸被含有 SH2 结构域的信号传导介胞质内的信号级联中，酪氨酸磷酸化位点可以与 Src、PLCγ等目标酶结磷酸化，也可作为 Grb2 等衔接蛋白的结合位点。Grb2 通过 SH3 结构域呤核苷酸释放因子 Sos 结合，形成 Grb2-Sos 复合物，该复合物的形成导致 Ras 基因的募集，并进一步激活了 GDP 和 GTP 之间的转化[58,59]（图 2）。
结果与分析.1 获得短尾表型突变小鼠成功繁育获得具有中、短尾表型的子代小鼠。短尾突变小鼠典型的表型特征部结构只有约 0.5-1.5 cm 的尾芽, 因此称之为“短尾（short tail）”，且大部分短鼠尾芽呈轻微卷曲状。与此同时，部分突变小鼠还存在“中尾（middletail）”的表型特征，其尾巴的长度介于短尾与正常尾之间，而且“中尾”表型小鼠的尾梢如同刀切愈合后的“圆头”状，区别于野生型小鼠鼠尾锥尖形的表征 (图 3、图 4)对突变小鼠后代尾长的观察中，我们发现突变小鼠尾长存在一定的差异，即短鼠的尾长普遍在 0.5-1.5 cm 范围之内，但也有个别更短或稍长的个体存在，而表型的小鼠尾长则有更复杂的情况，它们的尾长之差甚至可能达到 2 cm 以上。的结果似乎验证了有关报道提出的短尾表型严重程度与 Brachyury 基因剂量相的结论[2,7]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]FGF/FGFR信号调控成骨细胞分化的研究进展[J]. 李莉莉,魏琦岩,王艳芳,何忠梅,郜玉刚,马吉胜. 中国生物工程杂志. 2017(06)
[2]昆虫小器官RNA荧光原位杂交技术[J]. 陈敏,唐文倩,沈杰,王丹. 应用昆虫学报. 2016(06)
[3]T-box转录因子Brachyury在肿瘤相关研究中的进展[J]. 刘飞,唐旭东. 生命科学. 2015(02)
[4]Brachyury促进肺癌细胞增殖和侵袭、降低化疗敏感性[J]. 许可,刘斌,李晓玲,蒋雨峰,刘永煜. 解剖科学进展. 2014(06)
[5]E8.5-E12.5大鼠胚胎整体原位杂交技术[J]. 张吉霞,蔡玉瑾,谢耀丽,李海荣,乔从进,崔慧林. 神经解剖学杂志. 2013(03)
[6]脊索瘤新型标记物Brachyury相关研究的进展[J]. 刘栓得,初同伟. 重庆医学. 2013(02)
[7]小鼠早期胚胎的全胚原位杂交技术[J]. 肖銮娟,谢琪璇,高桥祐司,秋山泰身,董少男,黄卉卉,罗峰,叶绍恩,张春雪,秦俊文. 暨南大学学报(自然科学与医学版). 2011(06)
[8]地高辛标记的大鼠NGF RNA探针的制备和应用[J]. 沈宓,丁斐. 神经解剖学杂志. 2005(04)
[9]ENU诱导获得一种短尾小鼠及其突变基因的初步定位[J]. 邵义祥,陈兵,张成香,陈春波,薛整风,李厚达. 动物学杂志. 2005(01)
本文编号：3561545
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