马铃薯StRFP2基因的遗传转化及其抗旱性研究
发布时间：2022-01-02 02:47
泛素-蛋白酶体途径（UPP）是一种可逆的、存在于真核细胞中的蛋白质选择性降解的主要途径,决定泛素化过程特异性的泛素连接酶E3在调节植物逆境胁迫或应激反应等方面起着至关重要的作用。本课题组在前期的RNA-seq研究中发现马铃薯RING型泛素连接酶基因StRFP2在干旱胁迫下显著上调。本研究通过亚细胞定位确定了StRFP2基因在细胞中的表达部位;利用qRT-PCR检测马铃薯中StRFP2基因的组织特异性表达以及干旱胁迫响应;通过农杆菌介导的方法获得StRFP2基因的过表达和干扰表达的转基因马铃薯,进一步分析其抗旱性,从而为深入解析其抗旱机理提供基础。取得了如下主要研究结果:1.通过同源重组的方法构建pCEGFP-StRFP2融合蛋白瞬时表达载体,由农杆菌介导转化到烟草中,用激光共聚焦扫描显微镜观察发现StRFP2蛋白主要定位在细胞膜和细胞质中。2.通过qRT-PCR分析温室下的马铃薯盆栽苗“Atlantic”和“Qingshu 9”中StRFP2基因的组织特异性表达和干旱胁迫响应,结果发现StRFP2基因在两个品种的根、茎、叶中存在差异性表达,在叶中的表达量均最高;在“Atlantic”中...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
泛素/26S蛋白酶体途径[72]
马铃薯StRFP2基因的遗传转化及其抗旱性研究17表2.3StRFP2蛋白的互作蛋白Table2.3InteractionproteinsofStRFP2protein互作蛋白PredictedFunctionalPartners类型TypePGSC0003DMT400013613SNF2domain-containingprotein/helicasedomain-containingprotein/RINGfingerdomain-containingprotein.PGSC0003DMT400003284ProteinP21PGSC0003DMT400024491Conservedgeneofunknownfunction.PGSC0003DMT400095598HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400095511HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400094080HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400090890HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400088248HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400093060E3ubiquitin-proteinligaseUPL5PGSC0003DMT400088656E3ubiquitin-proteinligaseUPL5图2.1StRFP2的蛋白质互作网络Fig.2.1StRFP2proteininteractionnetwork2.3.2StRFP2基因的克隆通过PCR得到StRFP2基因的扩增产物，用1%的琼脂糖凝胶电泳检测结果显示其片段大小约为1437bp（图2.2），这与预期的目的片段大小相符。
甘肃农业大学2020届硕士学位论文18图2.2StRFP2基因的PCR扩增M：DL2000marker；1：StRFP2基因Fig.2.2PCRamplifiedStRFP2geneM:DL2000marker;1:StRFP2gene2.3.3pCEGFP-StRFP2载体的酶切鉴定重组质粒pCEGFP-StRFP2经NcoΙ酶切验证结果显示（图2.3），小片段在1473bp左右有明显条带，符合目的基因预期结果，经测序未发生任何突变，将其瞬时表达载体质粒命名为pCEGFP-StRFP2。图2.3pCEGFP-StRFP2质粒的酶切鉴定M：DL2000marker；1：pCEGFP-StRFP2质粒Fig.2.3IdentificationofpCEGFP-StRFP2byrestrictiondigestionM:DL2000marker;1:pCEGFP-StRFP2carrier2.3.4pCEGFP-StRFP2融合蛋白的荧光检测通过农杆菌侵染烟草叶片来观察pCEGFP-StRFP2融合蛋白在细胞中的瞬时表达情况（pCEGFP空载体作为阴性对照），结果发现pCEGFP-StRFP2融合蛋白主要在细胞膜上表达，在细胞质中也有微弱的绿色荧光，在细胞核中不表达，
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物抗旱研究进展[J]. 赵琴,官慧敏,吕洁心,张凤凤,刘晓倩. 南方农业. 2018(24)
[2]马铃薯StRFP2基因克隆及其生物信息学分析[J]. 唐勋,司怀军,张宁. 分子植物育种. 2018(09)
[3]amiRNA技术沉默C-3氧化酶编码基因StCPD对马铃薯抗旱性的影响[J]. 周香艳,杨江伟,唐勋,文义凯,张宁,司怀军. 作物学报. 2018(04)
[4]中国薯类加工现状与展望[J]. 木泰华,陈井旺. 中国农业科学. 2016(09)
[5]中国马铃薯主食产业化发展与展望[J]. 陈萌山,王小虎. 农业经济问题. 2015(12)
[6]植物组织特异性基因表达技术及其应用[J]. 方彦昊,南文斌,梁永书,张汉马. 植物生理学报. 2015(06)
[7]一种载体构建的新方法:重组融合PCR法[J]. 邝翡婷,袁定阳,李莉,李新奇. 基因组学与应用生物学. 2012(06)
[8]马铃薯产业的现状与发展[J]. 谢从华. 华中农业大学学报(社会科学版). 2012(01)
[9]逆境胁迫条件下脯氨酸对植物生长的影响[J]. 朱虹,祖元刚,王文杰,阎永庆. 东北林业大学学报. 2009(04)
本文编号：3563316
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
泛素/26S蛋白酶体途径[72]
马铃薯StRFP2基因的遗传转化及其抗旱性研究17表2.3StRFP2蛋白的互作蛋白Table2.3InteractionproteinsofStRFP2protein互作蛋白PredictedFunctionalPartners类型TypePGSC0003DMT400013613SNF2domain-containingprotein/helicasedomain-containingprotein/RINGfingerdomain-containingprotein.PGSC0003DMT400003284ProteinP21PGSC0003DMT400024491Conservedgeneofunknownfunction.PGSC0003DMT400095598HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400095511HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400094080HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400090890HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400088248HECT;UbiquitinPGSC0003DMT400093060E3ubiquitin-proteinligaseUPL5PGSC0003DMT400088656E3ubiquitin-proteinligaseUPL5图2.1StRFP2的蛋白质互作网络Fig.2.1StRFP2proteininteractionnetwork2.3.2StRFP2基因的克隆通过PCR得到StRFP2基因的扩增产物，用1%的琼脂糖凝胶电泳检测结果显示其片段大小约为1437bp（图2.2），这与预期的目的片段大小相符。
甘肃农业大学2020届硕士学位论文18图2.2StRFP2基因的PCR扩增M：DL2000marker；1：StRFP2基因Fig.2.2PCRamplifiedStRFP2geneM:DL2000marker;1:StRFP2gene2.3.3pCEGFP-StRFP2载体的酶切鉴定重组质粒pCEGFP-StRFP2经NcoΙ酶切验证结果显示（图2.3），小片段在1473bp左右有明显条带，符合目的基因预期结果，经测序未发生任何突变，将其瞬时表达载体质粒命名为pCEGFP-StRFP2。图2.3pCEGFP-StRFP2质粒的酶切鉴定M：DL2000marker；1：pCEGFP-StRFP2质粒Fig.2.3IdentificationofpCEGFP-StRFP2byrestrictiondigestionM:DL2000marker;1:pCEGFP-StRFP2carrier2.3.4pCEGFP-StRFP2融合蛋白的荧光检测通过农杆菌侵染烟草叶片来观察pCEGFP-StRFP2融合蛋白在细胞中的瞬时表达情况（pCEGFP空载体作为阴性对照），结果发现pCEGFP-StRFP2融合蛋白主要在细胞膜上表达，在细胞质中也有微弱的绿色荧光，在细胞核中不表达，
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物抗旱研究进展[J]. 赵琴,官慧敏,吕洁心,张凤凤,刘晓倩. 南方农业. 2018(24)
[2]马铃薯StRFP2基因克隆及其生物信息学分析[J]. 唐勋,司怀军,张宁. 分子植物育种. 2018(09)
[3]amiRNA技术沉默C-3氧化酶编码基因StCPD对马铃薯抗旱性的影响[J]. 周香艳,杨江伟,唐勋,文义凯,张宁,司怀军. 作物学报. 2018(04)
[4]中国薯类加工现状与展望[J]. 木泰华,陈井旺. 中国农业科学. 2016(09)
[5]中国马铃薯主食产业化发展与展望[J]. 陈萌山,王小虎. 农业经济问题. 2015(12)
[6]植物组织特异性基因表达技术及其应用[J]. 方彦昊,南文斌,梁永书,张汉马. 植物生理学报. 2015(06)
[7]一种载体构建的新方法:重组融合PCR法[J]. 邝翡婷,袁定阳,李莉,李新奇. 基因组学与应用生物学. 2012(06)
[8]马铃薯产业的现状与发展[J]. 谢从华. 华中农业大学学报(社会科学版). 2012(01)
[9]逆境胁迫条件下脯氨酸对植物生长的影响[J]. 朱虹,祖元刚,王文杰,阎永庆. 东北林业大学学报. 2009(04)
本文编号：3563316
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