产普鲁兰酶菌株的筛
发布时间：2022-01-06 00:46
普鲁兰酶（Pullulanase,EC 3.2.1.41）是一种淀粉脱支酶,能够专一性地作用于普鲁兰糖、支链淀粉、极限糊精中的α-l,6糖苷键,切下整个侧枝,形成直链淀粉,是淀粉加工业中的关键酶,在食品、酿造、医疗、化工等行业中也有着极大的应用需求。本研究以淀粉厂污水为原料,旨在筛选出产普鲁兰酶优势菌株,对其进行菌种鉴定,克隆出其普鲁兰酶基因并通过异源表达提高其发酵水平,研究纯化后的重组酶的酶学性质,对国内普鲁兰酶的开发和应用具有重要意义。主要研究内容如下:（1）通过以支链淀粉为唯一碳源进行初筛,普鲁兰糖培养基进一步鉴定,结合酶活力测定,从淀粉厂污水中分离筛选出一株产普鲁兰酶活力较高的菌株LK18（1.53±0.16 U/mL）。通过形态特征观察、生理生化试验、16S rDNA序列同源性分析及系统进化树构建等方法,将其鉴定为Paenibacillus puldeungensis,并命名为Paenibacillus puldeungensis LK18。（2）选取与Paenibacillus puldeungensis LK18的16S rDNA同源性较高的菌株的普鲁兰酶蛋白序列进行多序...
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
普鲁兰糖的水解方式
us GK-24 75 5.5 65 构与催化机理构特征糖基水解酶 GH13 家族（又称 α-淀粉酶家族），类都含有 4 个保守的结构域（I~IV），共同组鲁兰酶也含有 4 个这样的结构域（表 1-3）， α 螺旋结构的形成，它们组成了(β/α)8桶状结构叠桶第三个 β 折叠和第三个 α 螺旋之间的一个和活性口袋；结构域 III 位于结构域 I 的 C 端，结构；结构域 IV 位于结构域 I 的 N 端，是由反向平行 β 片层的 β 三明治型结构[29]。
图 2-1 葡萄糖标准曲线Fig.2-1 The standard curve of glucose图 2-1 所示，以葡萄糖为标准品，采用 DNS 绘制标准曲线，曲线方程11x-0.0227，相关系数 R2=0.9984，表明在测定范围内，葡萄糖浓度和 OD的线性关系。菌种筛选过以支链淀粉为唯一碳源的培养基进行初筛，共挑选出 32 株碘液染色后能水解圈（图 2-2a）的菌株，将其转接到普鲁兰糖鉴别培养基进一步鉴定， 6 株在普鲁兰糖鉴别培养基上呈现出较大透明圈（图 2-2b）的菌株。将这种到发酵培养基进一步发酵培养，通过 DNS 法测定其发酵上清液酶活力其中菌株 LK18 的酶活力最高，为 1.53±0.16 U/mL，将其作为后期研究的对
【参考文献】：
期刊论文
[1]浅谈淀粉酶在动物生产中的应用研究进展[J]. 张余慧,程晓芳,袁丹丹,王琤(华韦). 广东饲料. 2018(03)
[2]普鲁兰酶处理麦芽对啤酒中风味物质的影响[J]. 汪裕强,张明生,莫龙久. 科学技术与工程. 2017(07)
[3]产耐热普鲁兰酶菌株的分离、筛选与鉴定[J]. 高涛,王芳,别小妹,吕凤霞,赵海珍,张充,陆兆新. 食品科学. 2017(08)
[4]普鲁兰酶对大麦酿酒性能的影响[J]. 桑戈,田德雨. 啤酒科技. 2015(07)
[5]淀粉转化生产葡萄糖工艺研究进展[J]. 林亲录,周丽君,符琼. 食品工业科技. 2011(04)
[6]GH57家族高温淀粉普鲁兰酶的结构与功能分析[J]. 焦豫良,王淑军,吕明生. 微生物学报. 2011(01)
[7]全酶法制备超高麦芽糖浆工艺[J]. 叶红玲,杜先锋. 食品科学. 2010(20)
[8]高直链淀粉性质及应用研究[J]. 王中荣,刘雄. 粮食与油脂. 2005(11)
[9]碱性普鲁兰酶产生菌选育和发酵条件的研究[J]. 马晓军,张晓君,王锐,陈拓,杨玲,冯清平. 西北植物学报. 2002(04)
[10]耐酸耐热普鲁兰酶菌株的筛选及发酵条件的研究[J]. 唐宝英,朱晓慧,刘佳. 微生物学通报. 2001(01)
博士论文
[1]重组Bacillus deramificans普鲁兰酶的高效胞外表达及其应用[D]. 邹纯.江南大学 2016
[2]普鲁兰酶的产生菌筛选及其表达与分泌调控[D]. 陈文波.江南大学 2013
[3]Ⅰ型普鲁兰酶产业菌的筛选及其基因克隆、分子改造和高密度发酵表达研究[D]. 乔宇.中国农业科学院 2012
硕士论文
[1]蜡状芽孢杆菌CZ磷酸甘露糖异构酶基因（pmi）的克隆表达及酶学性质研究[D]. 张瑶.华南理工大学 2017
[2]苏云金芽孢杆菌BTR05普鲁兰酶基因的克隆与表达[D]. 李桂龙.齐鲁工业大学 2016
[3]Paenibacillus polymyxa Nws-pp2普鲁兰酶的基因克隆、异源表达与酶学性质研究[D]. 马静.华东理工大学 2015
[4]来源于Anoxybacillus sp.的普鲁兰酶Pul28的基因克隆与表达及其酶学性质研究[D]. 孙晓晨.中国农业科学院 2012
[5]普鲁兰酶产生菌的筛选及其酶学性质的研究[D]. 朱梦.海南大学 2010
本文编号：3571373
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
普鲁兰糖的水解方式
us GK-24 75 5.5 65 构与催化机理构特征糖基水解酶 GH13 家族（又称 α-淀粉酶家族），类都含有 4 个保守的结构域（I~IV），共同组鲁兰酶也含有 4 个这样的结构域（表 1-3）， α 螺旋结构的形成，它们组成了(β/α)8桶状结构叠桶第三个 β 折叠和第三个 α 螺旋之间的一个和活性口袋；结构域 III 位于结构域 I 的 C 端，结构；结构域 IV 位于结构域 I 的 N 端，是由反向平行 β 片层的 β 三明治型结构[29]。
图 2-1 葡萄糖标准曲线Fig.2-1 The standard curve of glucose图 2-1 所示，以葡萄糖为标准品，采用 DNS 绘制标准曲线，曲线方程11x-0.0227，相关系数 R2=0.9984，表明在测定范围内，葡萄糖浓度和 OD的线性关系。菌种筛选过以支链淀粉为唯一碳源的培养基进行初筛，共挑选出 32 株碘液染色后能水解圈（图 2-2a）的菌株，将其转接到普鲁兰糖鉴别培养基进一步鉴定， 6 株在普鲁兰糖鉴别培养基上呈现出较大透明圈（图 2-2b）的菌株。将这种到发酵培养基进一步发酵培养，通过 DNS 法测定其发酵上清液酶活力其中菌株 LK18 的酶活力最高，为 1.53±0.16 U/mL，将其作为后期研究的对
【参考文献】：
期刊论文
[1]浅谈淀粉酶在动物生产中的应用研究进展[J]. 张余慧,程晓芳,袁丹丹,王琤(华韦). 广东饲料. 2018(03)
[2]普鲁兰酶处理麦芽对啤酒中风味物质的影响[J]. 汪裕强,张明生,莫龙久. 科学技术与工程. 2017(07)
[3]产耐热普鲁兰酶菌株的分离、筛选与鉴定[J]. 高涛,王芳,别小妹,吕凤霞,赵海珍,张充,陆兆新. 食品科学. 2017(08)
[4]普鲁兰酶对大麦酿酒性能的影响[J]. 桑戈,田德雨. 啤酒科技. 2015(07)
[5]淀粉转化生产葡萄糖工艺研究进展[J]. 林亲录,周丽君,符琼. 食品工业科技. 2011(04)
[6]GH57家族高温淀粉普鲁兰酶的结构与功能分析[J]. 焦豫良,王淑军,吕明生. 微生物学报. 2011(01)
[7]全酶法制备超高麦芽糖浆工艺[J]. 叶红玲,杜先锋. 食品科学. 2010(20)
[8]高直链淀粉性质及应用研究[J]. 王中荣,刘雄. 粮食与油脂. 2005(11)
[9]碱性普鲁兰酶产生菌选育和发酵条件的研究[J]. 马晓军,张晓君,王锐,陈拓,杨玲,冯清平. 西北植物学报. 2002(04)
[10]耐酸耐热普鲁兰酶菌株的筛选及发酵条件的研究[J]. 唐宝英,朱晓慧,刘佳. 微生物学通报. 2001(01)
博士论文
[1]重组Bacillus deramificans普鲁兰酶的高效胞外表达及其应用[D]. 邹纯.江南大学 2016
[2]普鲁兰酶的产生菌筛选及其表达与分泌调控[D]. 陈文波.江南大学 2013
[3]Ⅰ型普鲁兰酶产业菌的筛选及其基因克隆、分子改造和高密度发酵表达研究[D]. 乔宇.中国农业科学院 2012
硕士论文
[1]蜡状芽孢杆菌CZ磷酸甘露糖异构酶基因（pmi）的克隆表达及酶学性质研究[D]. 张瑶.华南理工大学 2017
[2]苏云金芽孢杆菌BTR05普鲁兰酶基因的克隆与表达[D]. 李桂龙.齐鲁工业大学 2016
[3]Paenibacillus polymyxa Nws-pp2普鲁兰酶的基因克隆、异源表达与酶学性质研究[D]. 马静.华东理工大学 2015
[4]来源于Anoxybacillus sp.的普鲁兰酶Pul28的基因克隆与表达及其酶学性质研究[D]. 孙晓晨.中国农业科学院 2012
[5]普鲁兰酶产生菌的筛选及其酶学性质的研究[D]. 朱梦.海南大学 2010
本文编号：3571373
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