ChIP-Seq技术检测16HBE细胞BPDE加合靶基因分析

发布时间：2022-01-06 10:36

　　目的:苯并[a]芘（B[a]P）经过代谢活化后形成终致癌物7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘（BPDE）,与DNA亲和位点共价结合形成BPDE-DNA加合物诱发基因突变,是苯并[a]芘（B[a]P）诱发肺癌等肿瘤的重要机制之一,但其加合形成加合物的靶基因目前研究还不全面。本次研究旨在利用染色质免疫共沉淀测序技术（ChIP-Seq）,全面分析BPDE加合基因及其功能和信号通路,为进一步寻找B[a]P靶基因,深入研究B[a]P致癌机制提供科学依据。方法:选取人支气管上皮样细胞株16HBE细胞进行培养。甲醛交联后收集细胞,调整细胞浓度2′10⁷/ml,加入对应体积的细胞裂解缓冲液,将裂解产物等分为BPDE孵育组与DMSO溶剂对照组,分别与BPDE储备液和等体积DMSO混匀,37℃孵育24h后,进行超声处理使细胞破碎,将染色质片段化为可检测的大小（100-500bp）,用琼脂糖凝胶电泳检测片段大小。以标准的免疫沉淀方法,采用Anti-BPDE body（Clone-8E11）及A/G磁珠富集BPDE-DNA复合物。BPDE-DNA复合物洗脱和反交联后进行纯化,对照品... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

染色质片段化情况

图 2.阳性对照、阴性对照及 Input 扩增产物 紫外分光光度计检测两个重复 BPDE ChIP 样品 ChIP-Seq 使用，见表 3。DNA 的浓度及纯度达的送样要求：浓度 1ng/μL；纯度 OD260/280 为

不同细胞浓度的胶图

【参考文献】：
期刊论文
[1]BaP诱导细胞恶性转化过程中DNA甲基化水平的变化[J]. 刘海龙,高玮,古盼,邓燕霞,黄新凤,吴德生,刘建军,黄海燕.  癌变·畸变·突变. 2017(01)
[2]环境因素对DNA甲基化的影响[J]. 曹家雪,张红平,杜立新.  遗传. 2013(07)
[3]毒理基因组学研究进展[J]. 陆韻,侯凌燕,胡洪营,李莉.  生态环境学报. 2010(09)
[4]苯并（a）芘作用下人胚肺细胞JWA基因的表达及其与DNA损伤修复的关系[J]. 顾灯安,李爱萍,朱婷,叶健,周建伟.  中华预防医学杂志. 2005(03)
[5]毒理基因组学对毒理学发展的影响[J]. 庄志雄.  卫生毒理学杂志. 2005(01)



本文编号：3572297