稻纵卷叶螟Calreticulin基因的鉴定与功能分析

发布时间：2022-01-10 22:47

　　钙网蛋白（Calreticulin,CRT）是一种内质网膜或肌质网膜上的钙离子结合蛋白,主要参与调控蛋白质的正确折叠,维持昆虫体内钙离子的平衡以及昆虫免疫反应.基于稻纵卷叶螟（Cnaphalocrocis medinalis）的转录组数据库,我们鉴定到两个Calreticulin基因,分别命名为CmCRT1和CmCRT2.CmCRT1开放阅读框为3194 bp,编码397个氨基酸;CmCRT2的开放阅读框为1206 bp,编码401个氨基酸.进化树分析显示CmCRT1主要与大蜡螟CRT有较高的同源性,而CmCRT2主要与丽蝇蛹集金小峰的CRT保持较高的亲缘关系.组织表达分析显示CmCRT在血淋巴中具有较高的表达水平,其次是脂肪体及中肠.发育时期表达分析表明CmCRTs主要在稻纵卷叶螟的蛹期及成虫期表达.此外,CmCRT基因经大肠杆菌（Escherichia coli）刺激后可被显著诱导表达.综上所述,本研究为进一步研究稻纵卷叶螟CRT的功能奠定基础. 

【文章来源】：赣南师范大学学报. 2020,41(06)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

稻纵卷叶螟CmCRTs的结构特征

为了确定CmCRTs基因在稻纵卷叶螟(C. medinalis)幼虫不同组织及其不同发育阶段的表达模式,利用荧光定量PCR对幼虫的中肠,表皮,血淋巴,脂肪体及头,以及对处于1龄,2龄,3龄,4龄阶段及蛹,成虫期的相对表达量进行检测.结果显示,CmCRT1在稻纵卷叶螟幼虫组织中的表达模式为:在血淋巴中的表达量为在表皮中的表达量的7.58倍,在脂肪体中的表达量为在表皮中的表达量的3.3倍,而在头及表皮中的表达量类似;CmCRT1在稻纵卷叶螟不同发育阶段的表达模式为:相对于蛹期及成虫期,在虫体早期(1龄,2龄,3龄,4龄)低表达;CmCRT2则在血淋巴中高表达,为在头中的12.57倍,在脂肪体中的表达量为在头的9.77倍;CmCRT2在稻纵卷叶螟的1龄至3龄第1天低表达,但在3龄第1天之后的表达量迅速增多,直至蛹期,如图6所示.2.5 CmCRT在经免疫刺激后稻纵卷叶螟幼虫中的表达模式

2.5 CmCRT在经免疫刺激后稻纵卷叶螟幼虫中的表达模式CRT基因在许多微生物中已成功被诱导表达.为了确定CmCRTs在经免疫刺激后的稻纵卷叶螟(C. medinalis)幼虫中的表达模式,利用RT-qPCR及Western blot检测其在幼虫整体中的表达量.结果显示,经大肠杆菌(E.coli)处理4 h时,CmCRT1基因的mRNA表达量显著上调,而在4 h至8 h时间段内则下降;在经大肠杆菌(E.coli)处理24 h时,CmCRT1基因的mRNA表达量对比其在12 h时的表达量保持在一个较高的水平;而CmCRT1蛋白质的表达量在幼虫经大肠杆菌(E.coli)免疫刺激后的不同时间中的表达量与其mRNA在相对应的时间段的表达模式类似,如图7所示.


本文编号：3581561