黑曲霉基因组中单宁酶基因的挖掘筛选及蛋白表达研究
发布时间：2022-01-11 03:29
单宁酰基水解酶（单宁酶,EC3.1.1.20）可催化单宁的水解,广泛应用于皮革、制药、饮料和食品工业。目前主要应用于茶叶、橡子酒和生产没食子酸。同时,单宁酶可用作果汁澄清剂和咖啡软饮料的调味剂,有助于减少单宁对茶饮料和食品中的不利影响;用于动物食品制剂中作为添加剂,提高动物的消化率;用于环境生物技术,例如处理富含多酚类物质的制革废水。产单宁酶微生物种类繁多,在大部分真菌、细菌和酵母中均存在,其中曲霉菌属产单宁酶量最高。本文以一株低蛋白背景的黑曲霉菌株为出发菌株,构建单宁酶黑曲霉表达系统,对黑曲霉基因组中单宁酶基因进行挖掘,筛选出单宁酶酶活最高的菌株,并对其酶学性质进行研究,主要研究了以下内容:（1）从AspGD数据库中找到黑曲霉中有17个与单宁酶有关的基因,将其氨基酸序列进行比对进行系统进化树分析。利用同源重组原理成功构建出17个单宁酶的黑曲霉过量表达菌株。（2）利用适合测定胞外单宁酶酶活的可见分光光度法,对17株重组单宁酶菌株进行酶活的测定及蛋白含量的测定,最后筛选出单宁酶酶活最高的一株黑曲霉转化株Bdel4Tan7,发酵液上清第168 h酶活最高达到111.9...
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
单宁的分类Fig1-1Classificationoftannins
图 1-2 没食子单宁的酶促生物降解途径Fig 1-2 Gallotannin enzymatic biodegradation pathways宁酶宁酶（单宁酰基水解酶，EC 3.1.1.20）是一种在单宁酸等底物或底物类似的诱导酶[12]，可以在水相中水解没食子酸单宁和没食子酸酯类中的酯键及并在有机相中与各种醇和二醇合成没食子酸酯。单宁酶的性质宁酶广泛存在于细菌、酵母、霉菌和植物中[13]，尤其在黑曲霉和米曲霉中外观呈白色或淡黑色粉末，可溶于水形成无色、澄清、透明的溶液，不溶于 nm 处有吸收峰[6]。宁酶的理化性质是单宁酶研究中比较热门的话题之一，如表 1-1 所示。单
第二章 黑曲霉基因组单宁酶基因的挖掘及高效表达工程菌的筛选.06 MPa，温度为 34℃，初始风量为 1 m3/h，初始转速为 200 rpm，溶氧控制氧低于 50%时，逐步提高风量和转速），初始 pH 为 5.5，当 pH 降至 4.5 时H 为 4.5 的条件下培养，将浓度为 39%~42%的麦芽糖浆作为补料液。测定发酵液酶活。验结果与讨论黑曲霉基因组中的单宁酶基因分析结果 17 个单宁酶基因的氨基酸序列用软件 MEGA7 进行比对得到系统进化树所示。
本文编号：3581996
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
单宁的分类Fig1-1Classificationoftannins
图 1-2 没食子单宁的酶促生物降解途径Fig 1-2 Gallotannin enzymatic biodegradation pathways宁酶宁酶（单宁酰基水解酶，EC 3.1.1.20）是一种在单宁酸等底物或底物类似的诱导酶[12]，可以在水相中水解没食子酸单宁和没食子酸酯类中的酯键及并在有机相中与各种醇和二醇合成没食子酸酯。单宁酶的性质宁酶广泛存在于细菌、酵母、霉菌和植物中[13]，尤其在黑曲霉和米曲霉中外观呈白色或淡黑色粉末，可溶于水形成无色、澄清、透明的溶液，不溶于 nm 处有吸收峰[6]。宁酶的理化性质是单宁酶研究中比较热门的话题之一，如表 1-1 所示。单
第二章 黑曲霉基因组单宁酶基因的挖掘及高效表达工程菌的筛选.06 MPa，温度为 34℃，初始风量为 1 m3/h，初始转速为 200 rpm，溶氧控制氧低于 50%时，逐步提高风量和转速），初始 pH 为 5.5，当 pH 降至 4.5 时H 为 4.5 的条件下培养，将浓度为 39%~42%的麦芽糖浆作为补料液。测定发酵液酶活。验结果与讨论黑曲霉基因组中的单宁酶基因分析结果 17 个单宁酶基因的氨基酸序列用软件 MEGA7 进行比对得到系统进化树所示。
本文编号：3581996
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