基于雌激素受体的全人源基因表达调控系统的构建与优化

发布时间：2022-01-17 08:46

　　目前基因治疗已经成为精准医疗体系中重要组成部分。然而,靶标基因在体内表达量的不可控给基因治疗的安全性带来一定风险。本研究在雌激素受体诱导系统的基础上,优化构建了全人源基因调控系统,并通过绿色荧光（Green fluorescent protein,GFP）或荧光素酶（Gaussia luciferase,Gluc）跟踪诱导系统的活性。当使用外源诱导药物4-羟基他莫昔芬和内源诱导药物17β-雌二醇进行诱导时,前者可以高效诱导GFP和Gluc在HEK293细胞中的表达,并且表达强度与剂量呈正相关。通过水高压将载体注入小鼠体内,进行药物诱导后发现,4-羟基他莫昔芬更高效的诱导报告基因GFP的表达。成年小鼠尾静脉注射1×10¹³vg/kg的AAV2/8-pZFHD1-hER-GFP病毒实验结果显示,第一次给药后,能够明显观察到GFP在肝脏组织的表达,但是药物在小鼠体内被代谢后,GFP的表达消失;当再次给药后,GFP荧光又重新被诱导。综上所述,本研究构建的人源化雌激素受体介导的调控系统在体内外均可调控目的基因的表达及开关。 

【文章来源】：内蒙古大学学报(自然科学版). 2020,51(04)北大核心

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

全人源基因表达调控系统的模式图

为了探究外源药物的诱导效率与HEK293细胞毒性的关系,使用0.001-10μmol/L的4-OHT和17β-E2诱导48h后检测细胞上清液中荧光素酶的表达,结果如图4。两种诱导剂在0.001μmol/L即可显著诱导外源基因的表达,且随着药物浓度的增加逐渐上升,诱导系统有着良好的药物灵敏性。随着药物浓度越高,hER系统所产生的细胞毒性也越大(图5)。4-OHT和17β-E2浓度在0.5μmol/L以上时,细胞的存活率均显著下降(P<0.001)。为了保证较低的细胞毒性与较高的表达水平,最适的诱导浓度范围在0.3-0.5μmol/L。图3 HEK293细胞Gluc表达结果

图2 HEK293细胞中GFP表达结果(标尺=100μm),绿色荧光(图中白色点状物)为GFP蛋白表达图4 HEK293细胞中4-OHT、17β-E2在不同浓度下的Gluc基因表达情况

【参考文献】：
期刊论文
[1]他莫昔芬临床应用研究进展[J]. 丁瑜莉,王海霞,俞腾飞.  国际药学研究杂志. 2016(02)
[2]米非司酮联合他莫昔芬治疗子宫肌瘤100例疗效分析[J]. 彭跃辉.  中国当代医药. 2010(21)



本文编号：3594428