白念珠菌CaRSN1基因的功能研究

发布时间：2022-01-20 13:11

　　白念珠菌（Canidia albicans）是一种条件致病真菌,对于免疫力低下的人群具有严重的危害性。由于临床上抗真菌药物的滥用,出现了大量具有耐药性的白念珠菌突变株。白念珠菌中的钙信号途径参与调控细胞的各种代谢反应,同时也与白念珠菌的菌丝发育和毒力相关。通过对白念珠菌钙信号途径相关基因的研究有助于揭示白念珠菌的致病和耐药性机理,为开发新的抗真菌药物提供新的思路。拟南芥（Arabidopsis thaliana）AtCsc1蛋白是一种被高渗压力激活的钙离子通透性非选择性的阳离子通道,在本研究中通过序列比对,发现了白念珠菌中的五种与At Csc1蛋白同源的蛋白,通过对编码合成这五种蛋白的基因中的两个基因CaRSN1和CaCSC1的敲除,构建了rsn1/rsn1和csc1/csc1基因缺失株。对rsn1/rsn1和csc1/csc1基因缺失株的表型筛选实验表明,CaRsn1和CaCsc1蛋白参与白念珠菌细胞内的部分离子的稳态的调节以及与细胞壁和细胞膜的完整性相关。白念珠菌的菌丝发育能力和毒力与它的致病性具有直接的关系,YPD+10%胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）、... 

【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 白念珠菌简介
    1.2 白念珠菌的二相性与毒力
        1.2.1 白念珠菌的二相性
        1.2.2 白念珠菌的毒力
    1.3 抗真菌药物与白念珠菌的耐药性
        1.3.1 抗真菌药物
        1.3.2 白念珠菌的耐药性
    1.4 钙信号途径
    1.5 类anoctamin超家族简介
        1.5.1 TMEM16家族
        1.5.2 DUF221家族
        1.5.3 白念珠菌中与AtCsc1同源的蛋白
    1.6 本课题研究的内容与意义
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验试剂与试剂盒
        2.1.3 实验所用的菌株、质粒和引物
        2.1.4 实验所用的溶液及其配制方法
        2.1.5 实验所用培养基
    2.2 实验方法
        2.2.1 菌株的培养与保存
        2.2.2 白念珠菌基因组的提取
        2.2.3 白念珠菌的转化
        2.2.4 大肠杆菌中质粒的提取
        2.2.5 PCR扩增DNA片段
        2.2.6 酶切体系的构建
        2.2.7 利用同源重组的连接体系的构建
        2.2.8 大肠杆菌的转化
        2.2.9 菌丝发育实验
        2.2.10 小鼠实验
        2.2.11 倍比稀释点板表型筛选实验
        2.2.12 白念珠菌的荧光定位观察
第三章 实验结果与讨论
    3.1 CaRSN1和CaCSC1基因的敲除
        3.1.1 白念珠菌基因的敲除策略
        3.1.2 CaRSN1和CaCSC1基因敲除的结果
    3.2 白念珠菌csc1/csc1和rsn1/rsn1缺失株表型的筛选
        3.2.1 白念珠菌csc1/csc1缺失株表型的筛选
        3.2.2 白念珠菌rsn1/rsn1缺失株表型的筛选
    3.3 白念珠菌rsn1/rsn1缺失株的菌丝发育
    3.4 白念珠菌rsn1/rsn1缺失株的毒力研究
        3.4.1 整合CIp 10 质粒
        3.4.2 小鼠感染实验
    3.5 白念珠菌CaRsn1蛋白的亚细胞定位
        3.5.1 表达CaRsn1-GFP融合蛋白的菌株的构建及鉴定
        3.5.2 CaRsn1蛋白的亚细胞定位
    3.6 CaRsn1与ScRsn1蛋白的同源性
        3.6.1 CaRsn1互补ScRsn1蛋白的功能的探究
        3.6.2 ScRsn1互补CaRsn1蛋白的功能的探究
主要结论与展望
    主要结论
    展望
致谢
参考文献
附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]白念珠菌钙稳态系统及钙信号途径的研究进展[J]. 喻其林,徐宁,李明春.  微生物学报. 2012(04)

博士论文
[1]高渗胁迫门控的钙通透阳离子通道的分离、鉴定与初步功能分析[D]. 侯聪聪.首都师范大学 2014



本文编号：3598885