烟草PRE1基因的克隆和功能分析
发布时间：2022-01-21 10:50
烟草是茄科烟草属植物,具有极高的药用价值和经济价值,烟草产业也为我国财政收入做出了巨大贡献。烟草的产量和品质直接影响了其价值。烟草生长至一定阶段,就会由营养生长转变为生殖生长,此时烟草体内大部分的营养物质就会被运输至顶端,叶片、茎、根系生长滞后,而烟草的主要利用价值在于叶片,为了使烟草在栽培中一直进行营养生长,多年来人们探索出来的最有效的也是运用最广泛的方法是打顶,原理是在烟草长出花序后的一段时间内,人为将其摘除,去除顶端优势,这样烟草就会不再进行生殖生长,从而使养分都分配到叶片之中,获得品质更好的烟叶。烟株对打顶伤害会产生多种生理响应,如植物激素源改变、根系二次生长、烟碱含量增加等。烟草 bHLH（basic/helix-loop-helix,bHLH）转录因子 PRE1（paclobutrazol resistance1）在植物体内可以整合多种激素信号调控细胞的伸长。我们检测到烟草打顶会促进PRE1的表达明显升高,推测其与烟草打顶后叶子的生长和根系的伸长有关,为了探究其对烟草生长发育的作用,本课题从烟草栽培品种K326（Nicotiana tabacum L.cv K326）中克隆...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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的伸长［６７】。这三个蛋白最先被证明可以促进植物细胞伸长的是ＰＲＥ１，有研宄表明，ｂＨＬＨ转录??因子ＡＣＥｓ通过与靶基因启动子区域相互作用直接激活细胞伸长的酶基因的表达，ＩＨＢ１通过与??ＡＣＥ相互作用干扰ＡＣＥｓ与靶基因结合从而负调控细胞伸长。ＰＲＥ］通过与ＡＣＥｓ竞争结合ＩＨＢ１??间接影响ＡＣＥ的活力，ＰＲＥ１通过恢复ＡＣＥ的转录活性，从而促进细胞伸长１？１（图２）。ＰＲＥ３??和ＰＲＥ６可以和ＡＩＦｓ?（负调控植物器官伸长的ＡＴＢＳ１作用因子）和ＨＦＲ１?（ＦＡＲ－ＲＥＤ］，长红细??胞聚集素）等ｂＨＬＨ蛋白相互作用从而正向调节器官伸长［６７］。??ＢＫ?ＧＡ??Ａ?１?＾?Ｒ?ＢＲ?Ｇ．Ａ?ａｕｘｉｎ??Ａｓｔａｊ；?ＢＺＲ１?ｉ?ｖｉｚ??ｉ?、备?ｆ??ＡＣＥｓ＾ｌＢ５?１＾１?ＰＲＥ１?ＰＲ￡１??／?＼?／?Ｉ??ＣＯ?ｕｇｈ，?－■：－??ｂＨＬＭ?ｄｒｎｗｔ?ｂＨＵＶＨＬＨ?ＨＬＨＭＬＨ?ｄｗＭｆ??（ＤＮＡＷｎｄｉｎｇ）?（ｎｏｎ－ＤＭＡ?ｂ＞ｎｄｔｎ〇）?（ｎｏｔｖ－ＯＭＡ?ｂｉｎｄｉｎｇｉ?ＰＡＲＩ??｜?Ｐｈｏｔｏｍｏｒｐｈｏｙｅｆｔｅｅｉｓ??｜?ｐＮ?ｐ｜Ｆ４???？?ｐ＾４〈?？?Ｈｉｇｈ?ｔ？ｍｐ＊ｎｒｔｕｎｉ?ｒｍｐｏｎ？？??Ｃ?ｂｒ??１?ＧＡｓ?Ａｕｘｍ??Ｂ２Ｒ１?／?／??ＯｓＢ２Ｒ１?／?／??７?＼?Ｗ??Ａｌ?ＩＢＨ１?，??ＰＲＥ１??Ｏｓ?ＩＢＨ１１?ＩＵ１??Ｖ?／??Ｏｉｌ?ｅｔｏｎｇａｌｉｏｎ??图２?ＰＲＥｌ参与调控细胞生长的三种分子机制％】??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｒｅｅ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｍｅｃｈａ
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【参考文献】：
期刊论文
[1]烟草重要基因篇:10.烟草转录因子基因[J]. 闫宁,张洪博. 中国烟草科学. 2015(04)
[2]烟草药用研究概述[J]. 田友清,丁平,张云庆. 中国药业. 2015(09)
[3]NAC转录因子在植物抗病和抗非生物胁迫反应中的作用[J]. 孙利军,李大勇,张慧娟,宋凤鸣. 遗传. 2012(08)
[4]植物bHLH转录因子家族的功能研究进展[J]. 刘晓月,王文生,傅彬英. 生物技术进展. 2011(06)
[5]烟草打顶研究进展[J]. 林中麟,石健林,周益. 江西农业学报. 2009(06)
[6]打顶对烟株根系活力及内源激素含量的影响[J]. 时向东,刘艳芳,文志强,黄克久,程刚. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(02)
[7]不同打顶时期对上部烟叶物理性状及化学成分的影响[J]. 张永安,周冀衡,黄义德,杨述元,王瑞强. 安徽农业科学. 2006(21)
[8]打顶时间对烤烟根系形态及烟碱含量的影响[J]. 易建华,贾志红,孙在军. 安徽农业科学. 2006(12)
[9]影响烟草中烟碱含量的因素及调控措施[J]. 薛剑波,符云鹏,尹永强. 安徽农业科学. 2005(06)
[10]打顶技术对烤烟产质量和生物碱组成的影响[J]. 林桂华,周冀衡,范启福,杨虹琦,曹睿玄. 中国烟草科学. 2002(04)
博士论文
[1]烟草花青素合成相关基因及转录因子基因的克隆与功能验证研究[D]. 白延红.西北农林科技大学 2012
硕士论文
[1]烟草NtLTP4基因的克隆及功能分析[D]. 郑新新.山东农业大学 2016
[2]基于烟草根尖组织响应打顶伤害的转录组分析根冠交流模式[D]. 宋丹丹.河南农业大学 2015
[3]烟草打顶前后根尖组织差异蛋白质组分析[D]. 王少鑫.河南农业大学 2014
[4]打顶时期对烤烟新陈代谢及产质量的影响[D]. 莫静静.河南农业大学 2009
本文编号：3600124
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ｂＨＬＨ转录因子结构Ｍｌ??
的伸长［６７】。这三个蛋白最先被证明可以促进植物细胞伸长的是ＰＲＥ１，有研宄表明，ｂＨＬＨ转录??因子ＡＣＥｓ通过与靶基因启动子区域相互作用直接激活细胞伸长的酶基因的表达，ＩＨＢ１通过与??ＡＣＥ相互作用干扰ＡＣＥｓ与靶基因结合从而负调控细胞伸长。ＰＲＥ］通过与ＡＣＥｓ竞争结合ＩＨＢ１??间接影响ＡＣＥ的活力，ＰＲＥ１通过恢复ＡＣＥ的转录活性，从而促进细胞伸长１？１（图２）。ＰＲＥ３??和ＰＲＥ６可以和ＡＩＦｓ?（负调控植物器官伸长的ＡＴＢＳ１作用因子）和ＨＦＲ１?（ＦＡＲ－ＲＥＤ］，长红细??胞聚集素）等ｂＨＬＨ蛋白相互作用从而正向调节器官伸长［６７］。??ＢＫ?ＧＡ??Ａ?１?＾?Ｒ?ＢＲ?Ｇ．Ａ?ａｕｘｉｎ??Ａｓｔａｊ；?ＢＺＲ１?ｉ?ｖｉｚ??ｉ?、备?ｆ??ＡＣＥｓ＾ｌＢ５?１＾１?ＰＲＥ１?ＰＲ￡１??／?＼?／?Ｉ??ＣＯ?ｕｇｈ，?－■：－??ｂＨＬＭ?ｄｒｎｗｔ?ｂＨＵＶＨＬＨ?ＨＬＨＭＬＨ?ｄｗＭｆ??（ＤＮＡＷｎｄｉｎｇ）?（ｎｏｎ－ＤＭＡ?ｂ＞ｎｄｔｎ〇）?（ｎｏｔｖ－ＯＭＡ?ｂｉｎｄｉｎｇｉ?ＰＡＲＩ??｜?Ｐｈｏｔｏｍｏｒｐｈｏｙｅｆｔｅｅｉｓ??｜?ｐＮ?ｐ｜Ｆ４???？?ｐ＾４〈?？?Ｈｉｇｈ?ｔ？ｍｐ＊ｎｒｔｕｎｉ?ｒｍｐｏｎ？？??Ｃ?ｂｒ??１?ＧＡｓ?Ａｕｘｍ??Ｂ２Ｒ１?／?／??ＯｓＢ２Ｒ１?／?／??７?＼?Ｗ??Ａｌ?ＩＢＨ１?，??ＰＲＥ１??Ｏｓ?ＩＢＨ１１?ＩＵ１??Ｖ?／??Ｏｉｌ?ｅｔｏｎｇａｌｉｏｎ??图２?ＰＲＥｌ参与调控细胞生长的三种分子机制％】??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｒｅｅ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｍｅｃｈａ
?＿??（ｔｕｎ．?ａｍｏ??Ｉ”，．ｖ?＊？Ｉ??—??－／?…二？?＼??ｌｉ?ｕ?—??＿？？ｗ?ｆ?＜?丨丨??Ｉ?Ｉ?＾?Ｔ?｜??＼?＼?．ｊ??ｒｔａｔ＊）?？？？?＊?％?＼?Ｋ?／??Ｍ？ｎ?？—ｉｉ?＼?＂Ｖ?ｍ?／??，ｔｗ，＾?Ｖ?？??．ＭＶ?ＢｕｏＭＩ?＼?Ｍ??ａｍ：?ｂｗｏｉｍｉ?？｜ｗｍｉ??ｍ??＜ｗ－?ｍｍ??．、？？＊？？?？＾＾＊＊＇＊＊＊??＇＊？?—??Ｍｚｉｎ?ｍｉｗ；??图３?ｐＣＡＭＢＩＡＩ３００质粒信息??Ｆｉｇ．?３?ｐＣＡＭＢＩＡＩ３００?ｐｌａｓｍｉｄ?ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ??４．６．２目的基因连接表达载体??（１）对经过双酶切后的溶液进行电泳检测验证，并割胶回收，连接表达载体，转入大肠杆菌，??然后在超净工作台进行涂平板（ｋａｎａ板），挑取单克隆菌体进行菌液ＰＣＲ，扩大培养后，提质粒。??（２）连接表达载体??表９表达载体连接体系??Ｔａｂｌｅ?９?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ?ｓｙｓｔｅｍ???＾?加样体积（ｆｉＬ）???１０，Ｔ４?ＤＮＡ?Ｌｉｇａｓｅ?ｂｕｆｆｅｒ?２．５??ＤＮＡ?３．５??ＰＣＡＭＢ１Ａ１３００?质粒?３．５??Ｔ４?ＤＮＡ?Ｌｉｇａｓｅ?１??Ｈ２０?１４．５??Ｔｏｔａｌ?ｖｏｌｕｍｅ?２５??（３）菌液ＰＣＲ??１７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]烟草重要基因篇:10.烟草转录因子基因[J]. 闫宁,张洪博. 中国烟草科学. 2015(04)
[2]烟草药用研究概述[J]. 田友清,丁平,张云庆. 中国药业. 2015(09)
[3]NAC转录因子在植物抗病和抗非生物胁迫反应中的作用[J]. 孙利军,李大勇,张慧娟,宋凤鸣. 遗传. 2012(08)
[4]植物bHLH转录因子家族的功能研究进展[J]. 刘晓月,王文生,傅彬英. 生物技术进展. 2011(06)
[5]烟草打顶研究进展[J]. 林中麟,石健林,周益. 江西农业学报. 2009(06)
[6]打顶对烟株根系活力及内源激素含量的影响[J]. 时向东,刘艳芳,文志强,黄克久,程刚. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(02)
[7]不同打顶时期对上部烟叶物理性状及化学成分的影响[J]. 张永安,周冀衡,黄义德,杨述元,王瑞强. 安徽农业科学. 2006(21)
[8]打顶时间对烤烟根系形态及烟碱含量的影响[J]. 易建华,贾志红,孙在军. 安徽农业科学. 2006(12)
[9]影响烟草中烟碱含量的因素及调控措施[J]. 薛剑波,符云鹏,尹永强. 安徽农业科学. 2005(06)
[10]打顶技术对烤烟产质量和生物碱组成的影响[J]. 林桂华,周冀衡,范启福,杨虹琦,曹睿玄. 中国烟草科学. 2002(04)
博士论文
[1]烟草花青素合成相关基因及转录因子基因的克隆与功能验证研究[D]. 白延红.西北农林科技大学 2012
硕士论文
[1]烟草NtLTP4基因的克隆及功能分析[D]. 郑新新.山东农业大学 2016
[2]基于烟草根尖组织响应打顶伤害的转录组分析根冠交流模式[D]. 宋丹丹.河南农业大学 2015
[3]烟草打顶前后根尖组织差异蛋白质组分析[D]. 王少鑫.河南农业大学 2014
[4]打顶时期对烤烟新陈代谢及产质量的影响[D]. 莫静静.河南农业大学 2009
本文编号：3600124
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