MAR组合提高重组CHO细胞转基因表达水平的研究
发布时间：2022-01-21 16:11
背景哺乳动物细胞表达系统由于其翻译后修饰类似于人源细胞而被广泛用于表达重组药物蛋白。中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞目前是生产治疗性重组蛋白的首选哺乳动物细胞系。转基因沉默和低表达水平是重组蛋白生产普遍存在的问题。前期实验已经证明,核基质结合区（matrix attachment region,MAR）能够提高CHO转基因表达,但MAR组合是否具备功能及其作用机制尚不清楚。目的探讨MAR组合对重组CHO细胞转基因表达的影响及其调控机制。方法PCR扩增人β-干扰素（humanβ-interferon MAR,iMAR）和β-珠蛋白MAR（humanβ-globin MAR,gMAR）序列,使用无缝克隆技术将i MAR和gMAR片段分别连接到线性载体表达盒侧翼,构建分别由巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）或猴病毒（simian virus 40,SV40）启动子驱动的重组质粒载体。转染CHO-K1细胞48 h后,用荧光显微镜分析转染效率和增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）...
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pEGFP-C1载体示意图
图 2：载体构建示意图毒 40 早期聚腺苷酸化信号；EGFP，增强绿色荧光蛋白；质粒用 Not I 和 Mlu I 双酶切；将合成的 SV40 启动子pn I 和 BamH I 双酶切；将合成的 Spacer 片段及 p I、Pac I 和 Bstz17 I 双酶切，酶切体系如下：-C1 质粒的双酶切体系如下：反应液组分 体积（μl）pEGFP-C1 质粒 8.0（4 μg）10×H buffer 2.0Not I 0.5（100 U）Mlu I 0.5（100 U）ddH2O 9放入 37 ℃水浴锅中孵育 3 h。
新乡医学院硕士学位论文细胞 2 遍，之后加入 500 μl PBS 重悬（SPSS Inc.，Chicago，IL，USA）对数异采用单因素方差分析，组间比较采用的。CR 扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳，结果显示所和 gMAR 大小分别为 2201bp 和 2160b
【参考文献】：
期刊论文
[1]椎旁肌间隙入路伤椎置钉技术治疗胸腰段骨折近期疗效分析[J]. 吴强,陈淑群. 系统医学. 2017(19)
[2]经皮与开放椎弓根螺钉内固定术治疗无神经损伤胸腰段骨折的疗效对比[J]. 文天林,孟浩,王飞,张思萌,李放. 中国脊柱脊髓杂志. 2016(05)
[3]比较不同方式置入椎弓根钉内固定修复胸腰椎爆裂骨折的生物相容性[J]. 侯煜,卜宏建,杨帆,王林杰,武士科,李盼祥,梁志兴,孙博,申志坤. 中国组织工程研究. 2016(09)
[4]经皮微创置入椎弓根螺钉内固定治疗胸腰椎骨折的临床疗效及对机体应激水平的影响[J]. 杨贤玉,张长江,李来好,李洪珂,潘登,王鹏程. 临床和实验医学杂志. 2015(14)
[5]椎弓根钉经椎旁肌间隙置入修复胸腰椎骨折:矫正效果及生物相容性随访[J]. 崔威,张勇鹏,张斌. 中国组织工程研究. 2015(22)
[6]脊柱胸腰段骨折行后路椎弓根螺钉内固定联合植骨手术的效果分析[J]. 崔显峰. 中外医疗. 2015(07)
[7]椎旁肌间隙入路伤椎置钉技术治疗胸腰段骨折近期疗效观察[J]. 徐海栋,赵建宁,刘刚,许斌. 医学研究生学报. 2015(01)
[8]经伤椎椎弓根椎体内植骨并置钉治疗胸腰椎骨折35例的疗效观察[J]. 林伟文,赖茂松,熊浩,凌华军,罗鹏刚,夏雄超,吴增志. 临床军医杂志. 2014(05)
[9]胸腰椎骨折伤椎复位技术的改进及临床应用[J]. 刘书茂,管波青,李书纲. 中国骨与关节外科. 2014(02)
[10]侧前方减压与后方减压治疗胸腰椎体爆裂性骨折的疗效比较[J]. 余雨,王娟,王群波. 重庆医科大学学报. 2013(11)
硕士论文
[1]核基质附着区调控CHO细胞转基因表达序列分子特征的研究[D]. 孙秋丽.新乡医学院 2016
[2]经椎弓根椎体内植骨椎弓根钉棒内固定治疗胸腰段爆裂骨折的疗效分析[D]. 胡业顺.山东中医药大学 2009
本文编号：3600580
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pEGFP-C1载体示意图
图 2：载体构建示意图毒 40 早期聚腺苷酸化信号；EGFP，增强绿色荧光蛋白；质粒用 Not I 和 Mlu I 双酶切；将合成的 SV40 启动子pn I 和 BamH I 双酶切；将合成的 Spacer 片段及 p I、Pac I 和 Bstz17 I 双酶切，酶切体系如下：-C1 质粒的双酶切体系如下：反应液组分 体积（μl）pEGFP-C1 质粒 8.0（4 μg）10×H buffer 2.0Not I 0.5（100 U）Mlu I 0.5（100 U）ddH2O 9放入 37 ℃水浴锅中孵育 3 h。
新乡医学院硕士学位论文细胞 2 遍，之后加入 500 μl PBS 重悬（SPSS Inc.，Chicago，IL，USA）对数异采用单因素方差分析，组间比较采用的。CR 扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳，结果显示所和 gMAR 大小分别为 2201bp 和 2160b
【参考文献】：
期刊论文
[1]椎旁肌间隙入路伤椎置钉技术治疗胸腰段骨折近期疗效分析[J]. 吴强,陈淑群. 系统医学. 2017(19)
[2]经皮与开放椎弓根螺钉内固定术治疗无神经损伤胸腰段骨折的疗效对比[J]. 文天林,孟浩,王飞,张思萌,李放. 中国脊柱脊髓杂志. 2016(05)
[3]比较不同方式置入椎弓根钉内固定修复胸腰椎爆裂骨折的生物相容性[J]. 侯煜,卜宏建,杨帆,王林杰,武士科,李盼祥,梁志兴,孙博,申志坤. 中国组织工程研究. 2016(09)
[4]经皮微创置入椎弓根螺钉内固定治疗胸腰椎骨折的临床疗效及对机体应激水平的影响[J]. 杨贤玉,张长江,李来好,李洪珂,潘登,王鹏程. 临床和实验医学杂志. 2015(14)
[5]椎弓根钉经椎旁肌间隙置入修复胸腰椎骨折:矫正效果及生物相容性随访[J]. 崔威,张勇鹏,张斌. 中国组织工程研究. 2015(22)
[6]脊柱胸腰段骨折行后路椎弓根螺钉内固定联合植骨手术的效果分析[J]. 崔显峰. 中外医疗. 2015(07)
[7]椎旁肌间隙入路伤椎置钉技术治疗胸腰段骨折近期疗效观察[J]. 徐海栋,赵建宁,刘刚,许斌. 医学研究生学报. 2015(01)
[8]经伤椎椎弓根椎体内植骨并置钉治疗胸腰椎骨折35例的疗效观察[J]. 林伟文,赖茂松,熊浩,凌华军,罗鹏刚,夏雄超,吴增志. 临床军医杂志. 2014(05)
[9]胸腰椎骨折伤椎复位技术的改进及临床应用[J]. 刘书茂,管波青,李书纲. 中国骨与关节外科. 2014(02)
[10]侧前方减压与后方减压治疗胸腰椎体爆裂性骨折的疗效比较[J]. 余雨,王娟,王群波. 重庆医科大学学报. 2013(11)
硕士论文
[1]核基质附着区调控CHO细胞转基因表达序列分子特征的研究[D]. 孙秋丽.新乡医学院 2016
[2]经椎弓根椎体内植骨椎弓根钉棒内固定治疗胸腰段爆裂骨折的疗效分析[D]. 胡业顺.山东中医药大学 2009
本文编号：3600580
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3600580.html
最近更新
教材专著
