PPARγ基因对脂肪干细胞迁移能力影响的研究

发布时间：2022-01-22 06:07

　　目的:细胞定向迁移是细胞修复的重要步骤,脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）拥有强大的自我更新及多向分化潜能,其移植是组织修复的潜在治疗手段。过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）对多种细胞的迁移有抑制作用,本实验为验证抑制PPARγ基因对ADSCs迁移能力的影响,通过PPARγ抑制剂BADGE作用于ADSCs,观察ADSCs迁移及增殖情况,检测与迁移相关的基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）以及SDF/CXCR4通路相关蛋白胞内表达情况,探讨PPARγ对ADSCs迁移所起的作用,及可能的信号通路。实验方法:1、提取人ADSCs进行体外培养;2、分别用含有不同浓度的PPARγ抑制剂BADGE作用于ADSCs;3、根据实验目的分为三组:A组:ADSCs+25μm/LBADGE+普通培养液;B组:ADSCs+50μm/LBADGE+普通培养液;C组:ADSCs+普通培养液;4、划痕实验及Transwell观察ADSCs的迁移情况,PCR、Westernblot分别检测各组MMP2、MMP9、CXCR4基因及蛋白表达水平... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

3代ADSCs形态（倒置显微镜，200X）

ADSCs成脂、成骨分化能力的检测

中国医科大学硕士学位论文10AB图2ADSCs成脂、成骨分化能力的检测A：ADSCs成脂诱导后14d油红O染色结果（光学显微镜，200X）B：ADSCs成骨诱导后21d茜素红染色结果（光学显微镜，200X）3.3抑制PPARγ基因后ADSCs在二维空间的迁移能力下降在细胞划痕的0、24、72h，取出细胞培养板，观察周边细胞向中央划痕区生长（修复）的速度，应用ImageJ软件计算中间划痕区域面积，如图3，并按照如下公式计算迁移率：细胞迁移率（%）=（划痕区面积0h－划痕区面积72h）／划痕区面积0h×100。在72h，普通培养液组迁移率约63%，25μm/LBADGE培养液组约43%，50μm/LBADGE培养液组约21%。25μm/LBADGE培养液组ADSCs的迁移率较普通培养液组降低了32%（P<0.05）；50μm/LBADGE培养液组ADSCs的迁移率较普通培养液组降低了67%（P<0.05）；25μm/L组较50μm/L组降低44%，如图4。图30h、24h、72h周边细胞向划痕区域生长情况（光镜下50X）


本文编号：3601679